张治业

(河南科技大学第一附属医院，河南洛阳 471003)

松茸属担子菌亚门、层菌属、伞菌目、口蘑科、口蘑属，具有很高的营养价值和药用价值。松茸含有多糖、氨基酸、蛋白质、多肽、萜类以及多种酶，国内外对其多糖虽有报道[1～3]，但缺乏系统分析研究。2010年 10～12月，我们提取松茸多糖组分，并检测其对人神经胶质瘤细胞系(U87)、人宫颈癌(He-La)、人胰腺导管上皮癌(PANC-1)以及人乳腺癌细胞系(MCF-7)的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 材料 二氧化碳培养箱(美国 Forma公司)，Thermo Multiskan MK3酶标仪(美国 Thermo公司)，5417R型台式高速冷冻离心机(德国 Eppendorf公司)，F-4500紫外分光光度计(日本 Hitachi公司)，FACSCalibur流式细胞仪(美国 Becton Dickinson公司)，CKX41倒置显微镜(日本 Olympus公司)，2720型 PCR仪 (美国 Applied Biosystems公司)，Tannon水平及垂直电泳槽(上海天能科技有限公司)，Tanon 3500凝胶图像分析系统(上海天能科技有限公司)。DMEM培养基购自 Thermo公司，RPMI-1640培养基 (美国 Gibco公司 )，胎牛血清 (FBS，杭州四季青公司)。U87以及 MCF-7细胞系购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，其他试剂为国产分析纯等。Trizol试剂(美国 Invitrogen公司)，MMMV逆转录酶和 Ex Taq酶(日本 TaKaRa公司)，p53、18SRNA引物(上海生工生物工程技术有限公司合成)，二甲基亚砜(DMSO)、碘化丙啶 (PI)和RNase以及其他常用生物试剂购自 Sigma公司(Sigma，USA)。松茸多糖由本实验室根据文献[4]自松茸中提取，松茸多糖用培养基配成 200μg/ml的储存液，使用前用培养基稀释到所需浓度。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 U87、PANC-1、MCF-7细胞用含10%FBS的 DMEM培养，HeLa细胞用含 10%FBS的 RPMI-1640培养，取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2 MTT法测定细胞生长 将处于对数生长期细胞接种于 96孔微量培养板内，培养 24 h待细胞贴壁后加入不同浓度的松茸多糖，每个浓度设 3个复孔(边缘孔不加样品，以避免“边缘效应”)，并设相应浓度的溶媒(即不加样品，仅加相应体积的样品溶解液)对照及无细胞调零孔。……