任海林，孙 岩，李世斌，韩瑞发

(天津医科大学第二医院天津市泌尿外科研究所，天津300211)

miR－17－5p 和 miR－20a 是 mir－17－92 基因簇产物，通过转录后基因沉默效应调控多种抑癌基因或癌基因的表达，在不同的肿瘤中起抑癌基因或癌基因的作用。E2F3属于转录因子E2F家族，在膀胱癌中有扩增和过表达［1］，E2F3有很强的促进 mir－17－92 基因簇启动子活性作用，并诱导 mir－17－92 基因簇表达［2，3］。我们期望通过研究 E2F3、miR－17－5p和miR－20a在膀胱癌组织中的表达情况，阐明E2F3、miR－17－5p 和 miR－20a 之间是否存在相关性。

1 材料与方法

1.1 材料 膀胱组织标本选用我院2009年10月～2010年2月行膀胱全切或部分切除术的20例膀胱组织，并经术后病理证实为膀胱移行细胞癌，新鲜组织获得后立即放置于－80℃超低温冰箱。患者术前均未行放疗、化疗与免疫治疗。其中男16例、女4例，年龄43～81岁、平均58.15岁。组织病理分级按照WHO(1973年)分级标准，其中G1级10例，G2级4例，G3级6例。另取10例开放前列腺摘除术患者的正常膀胱黏膜组织作为对照。膀胱移行细胞癌细胞系5637、T24购自中国医学科学院基础医学研究所，在含10%小牛血清RPMI－1640培养基，37℃、5%CO2条件下培养。总RNA提取试剂盒购自申能博彩生物科技有限公司;cDNAD第一链合成试剂盒购自 QIAGEN 公司;E2F3、miR－17－5p、miR－20a荧光探针和内参GAPDH、U6荧光探针，2×PCR TaqMan®Universal PCR，TaqMan®MicroRNA Reverse Transcription ki均购自 ABI公司;鼠抗人E2F3和GAPDH抗体购自Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 基因的表达检测 取冻存组织和膀胱移行细胞癌细胞系5637、T24，放于DEPC处理的1.5 ml EP管中。加组织裂解液后，应用超声细胞粉碎机粉碎组织，按试剂盒说明提取总RNA。按cDNAD第一链合成试剂盒说明用提取的总RNA逆转录合成第一链cDNAD，按2×PCR TaqMan®Universal PCR说明，以第一链cDNAD为模……