陈卫军，袁勇，王鲁妹，智永刚（.石河子大学医学院第一附属医院，石河子市 832008；2.石河子大学药学院，石河子市 832002）

异甘草素（Isoliquiritigenin，ISO）是甘草黄酮中的一种查尔酮成分，对结肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、大肠癌等多种肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用[1～3]。但ISO水溶性差，影响了其在医药领域的广泛应用。因此，寻找合适的药物剂型成为改善异甘草素的水溶性的有效途径。

固体脂质纳米粒（SLN）是极具开发潜力的药物载体，作为水溶性差的药物载体具有许多优越性，其应用日益受到重视[4，5]。本研究采用高压乳匀法制备ISO-SLN，建立其包封率的测定方法，结果表明，该法操作简单、可行、准确性较好，为ISO-SLN的研究奠定了一定的基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-2201紫外分光光度计（日本岛津公司）；FSH-Ⅱ高速电动匀浆器（江苏金坛市正基仪器有限公司）；JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所）；NS1001L PANDA 2K型高压匀质机（意大利Niro Soavi公司）；THZ-C振荡仪（江苏太苍市实验仪器厂）；透析袋（进口分装，相对分子质量：12000～14000，批号：20050102）。

1.2 试药

ISO（西安旭煌生物技术有限公司，批号：080631，含量：＞98%）；大豆卵磷脂（上海太伟药业有限公司，批号：070614，含量：90%）；泊洛沙姆188（南京威尔化工有限公司）；ISO-SLN（石河子大学医学院第一附属医院，批号：090702，规格：0.1 mg·mL－1）。

2 方法与结果

2.1 ISO-SLN的制备

采用高剪切乳化-高压乳匀法制备ISO-SLN。取处方量的ISO、单硬脂酸甘油酯和大豆卵磷脂，在（80±5）℃水浴下，使其完全溶解于10 mL无水乙醇中，作为有机相；取适量的泊洛沙姆188分散于同温度的50 mL水中，作为水相。在1800 r·min－1搅拌条件下，将有机相缓慢注入（80±5）℃水相中，持续搅拌2 h，形成初乳，在室温下，150 MPa高压乳匀5次，迅速冷至室温，得ISO-SLN水分散液。同法制备不含ISO的空白纳米粒分散液。

2.2 紫外分光光度法测定ISO-SLN中药物含量

2.2.1 ISO最大吸收波长的选择。精密移取ISO-SLN水分散液0.5 mL，无水乙醇10 mL超声10 min进行消解，空白纳米粒分散液同法处理后，以无水乙醇为空白对照，扫描紫外吸收光谱。结果，ISO在396 nm波长处有最大吸收，空白纳米粒分散液无干扰，见图1。

2.2.2 ISO-SLN中药物浓度的测定。精密吸取ISO-SLN分散液0.5 mL置于10 mL容量瓶中，加适量无水乙醇超声10 min进行消解，定容，在396 nm波长处测吸光度A，计算ISO质量浓度c。

2.2.3 ISO标准曲线的制备。取ISO约10.0 mg，精密称定，置于10 mL容量瓶内，加无水乙醇溶解并定容至刻度，制得浓度为1.12 mg·mL－1的贮备液。精密移取贮备液适量，置于100 mL的容量瓶中，用无水乙醇定容，制得浓度为11.2 μg·mL－1ISO稀释液。分别精密移取ISO稀释液适量，置于10 mL容量瓶中，加入无水乙醇至刻度，摇匀，制得浓度为1.12、2.24、3.36、4.48、5.6、6.72、7.84 μg·mL－1的ISO溶液。以A对c进行线性回归，得标准曲线方程 A＝0.10899c－0.0044（r＝0.9995，n＝5），表明ISO检测浓度线性范围为1.12～7.84 μg·mL－1。

2.2.4 精密度试验。取同一批供试品溶液（批号：090702），分别于同日及不同日各测定吸光度5次，结果日内、日间相对标准差分别为2.11%和2.63%，均小于5%，表明其精密度良好。2.2.5 加样回收率试验。精密吸取空白纳米粒分散液1 mL，分别置于10 mL容量瓶中，共9份，3份为1组。精密吸取不同体积ISO贮备液稀释液，分别与空白纳米粒分散液混合，无水乙醇定容，制备成低、中、高（2.24、4.48、6.72 μg·mL－1）3个浓度的样品，0.45 μm微孔滤膜过滤后，紫外法测定ISO浓度。结果低、中、高3个浓度样品的平均加样回收率分别为99.54%、99.11%、100.2%，RSD分别为0.87%、1.62%、0.89%。

2.3 透析法测定包封率的方法建立

2.3.1 透析介质及透析时间的确定[6]。分别以蒸馏水和2%泊洛沙姆188水溶液为透析介质，各取20 mL置于50 mL三角锥瓶中，将2份装有ISO-SLN水分散体1 mL的透析袋扎紧后，分别置于上述透析介质中，于恒温振荡仪中（37 ℃，80 r·min－1）振摇，分别于2、4、6、8、10、12、14、16 h精密吸取透析袋外液0.5 mL至5 mL容量瓶中，以无水乙醇定容，0.25 μm微孔滤膜过滤，紫外法测定药物浓度。同时，各透析介质补加0.5 mL。以时间t为横坐标，游离药物浓度c为纵坐标作图，见图2。

图2 采用不同透析介质时ISO浓度-时间曲线Fig 2 Concentration-time curves of ISO using different dialysis medium

由图2可见，以2%泊洛沙姆188水溶液为透析介质，透析袋外液药物浓度于8 h左右达到最大值，10～16 h透析袋药物浓度不再变化，说明透析已经达到平衡。因此，透析介质确定为2%泊洛沙姆188水溶液，透析时间定为8 h。

2.3.2 ISO加样回收率考察。精密吸取一系列不同浓度的ISO溶液，分别与空白纳米粒分散液混合，得标准混合液。移取该标准混合液1 mL置于透析袋内，2%泊洛沙姆188水溶液20 mL加于透析袋外，搅拌透析袋外液，透析8 h后，移取适量透析外液，紫外法测定浓度c1，计算总游离药物质量m1。以相同的透析条件测定ISO-SLN游离药物浓度c2，计算游离药物质量m2。按回收率（%）＝（m1－m2）/m×100%（m为ISO理论加入量）计算回收率。结果，ISO的加样回收率大于95%，符合ISO-SLN包封率测定的要求。

2.3.3 透析法测定包封率。取3批ISO-SLN 1 mL置于透析袋内，两端扎紧，置于20 mL透析介质中，透析8 h后，移取透析袋外液适量，紫外法分别测定游离药物浓度cf；另取未透析的ISO-SLN水分散体0.2 mL置于10 mL容量瓶中，无水乙醇消解定容，紫外法测定药物的总浓度ct，按包封率＝（ct×50－cf×21）（/ct×50）×100%公式计算得平均包封率为80.2%，RSD＝3.43%。

3 讨论

在测定药物包封率的方法中，分离的方法主要有离心法、透析法、凝胶柱层析法，各具特点。本研究依据实验室已有条件，结合包封率测定方法的特点，建立透析法测定ISO-SLN的包封率，结果表明该方法准确、简便，更适合ISO-SLN制备工艺优化时包封率的测定。

以水作透析介质，透析袋内、外液渗透压大，促进水进入透析袋内，稀释ISO-SLN水分散体，导致游离药物的透析速度慢及纳米粒渗透；以2%泊洛沙姆188为制备纳米粒时的外水相，并以其水溶液为透析介质，可以保证透析袋内、外液渗透压相同，游离药物顺浓度梯度透析，透析速度快，6 h即基本达到透析平衡。因此，为保证透析完全，本试验确定2%泊洛沙姆188水溶液为透析介质，透析时间为8 h。

[1]Takahashi T，Babaa M，Nishinob H.Cyclooxygenase-2 plays a suppressive role for induction of apoptosis in isoliquiritigenin-treated mouse colon cancer cells[J].Cancer Letters，2006，231（3）：319.

[2]Li T，Satomi Y，Katoh D，et al.Induction of cell cycle arrest and p21CIP1/WAF1expression in human lung cancer cells by isoliquiritigenin[J].Cancer Letters，2004，207（1）：27.

[3]Kanazawa M，Satomi Y，Mizutani Y，et al.Isoliquiritigenin inhibits the growth of prostate cancer[J].Eur Urol，2003，43（5）：580.

[4]宋金春，邓睿园，夏亚子，等.姜黄素固体脂质纳米粒制备工艺研究[J].中国药房，2009，20（18）：1383.

[5]曾 嵘，周知午，吴翠芳，等.蓝萼甲素固体脂质纳米粒的制备及理化性质研究[J].中国药房，2008，19（9）：666.

[6]王新春，侯世祥，李 文，等.白藜芦醇小麦醇溶蛋白纳米粒包封率测定方法的研究[J].中国中药杂志，2007，32（13）：1355.