王天琳，吴春福

尿嘧啶是RNA特有的碱基，是中枢神经系统中最重要的神经递质之一，除参与核苷酸的从头合成通路外，还可作为嘧啶核苷酸补救合成通路的基质，也是磷酸卵磷脂(PC)和脑磷脂(PE)合成通路中的重要物质［1-2］。近年来，其功能的多元化越发引起人们的注意，尿嘧啶含量的检测也逐渐成为人们关注的焦点［3］，但检测动物脑脊液中尿嘧啶的方法鲜有报道。因此，本文利用在体微透析技术结合高效液相色谱(HPLC)，建立了检测脑脊液中尿嘧啶含量的方法，为中枢系统研究中尿嘧啶含量的检测提供一种有效、可靠、重复性好的方法。

1 材料

1.1 仪器 岛津LC10AT型恒流泵，SPD10AVP紫外检测器，L2000色谱工作站;VertiSep GES-C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm，马来西亚);小鼠脑立体定位仪(第二军医大学江湾-1型C);307-2B型牙科台式电钻车(宁波医疗器械厂);ZSB-1A自动注射泵(航空航天部北京星达技术开发公司);透析管(分子量50 000 EICOM，日本)。

1.2 试剂与药品 Uracil标准品(Sigma，美国)，Uridine标准品(Sigma，美国);乙腈(色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心)，磷酸二氢钠(分析纯，沈阳市试剂三厂)，磷酸(分析纯，沈阳化学试剂厂)，Ringer's液(自制)，冰块(自制)。所有溶液均用去离子水配制。

1.3 实验动物 雄性昆明种小鼠［动物合格证号:SCXK(辽)2008-2010］，体质量18 ～22 g，购于沈阳药科大学实验动物中心，动物饲养在室温环境下，自由摄食饮水。

2 方法

2.1 色谱条件 色谱柱:VertiSep GES C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 0.02 mol/L磷酸二氢钠(2∶98)，磷酸调pH值为3～4;检测波长:260 nm;流速:0.8 mL/min;柱温:0～5℃;进样量20 μL;理论塔板数不低于2 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准品溶液的配制 精密称取Uracil和Uridine 溶于 Ringer's(147 mM NaCl，2.2 mM CaCl2，4 mM KCl)液［4］中，制得 Uracil和 Uridine浓度均为1.0 μg/mL的标准溶液，涡旋溶解，于4℃冰箱中保存，使用前经0.22 μm滤膜过滤。……