朱少平，赵金平，毛志福，黄 杰，王君钰，周雪峰，徐 明

肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)异常增殖是肺动脉高压(PAH)的常见病理特征，其直接后果是导致肺动脉分支狭窄甚至闭塞，肺循环阻力增高［1］。PAH患者和动物模型中5-羟色胺(Serotonin，5-hydroxytryptamine，5-HT)异常增高，是触发PAH的重要因素之一，其在PAH的病理发生和演变过程中担当着不可忽视的角色。5-HT是一种肺血管收缩剂和促有丝分裂剂，其促有丝分裂效应的实现主要依赖于一种与其具有高亲和力的5-HT转运体(5-HT transporter，5-HTT)。有研究表明，5-HTT抑制剂能逆转野百合碱诱导的大鼠PAH［2］，提示5-HTT的活性与PAH动物模型中肺血管重构密切相关。本研究拟通过观察5-HTT抑制剂氟西汀对离体PASMC体外增殖的影响，以期为5-HTT抑制剂治疗PAH提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料 Wistar大鼠(二级雄性，7周龄，湖北省实验动物中心提供)。氟西汀(Fluoxetine，Sigma，美国)，野百合碱(MCT，Sigma)，小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司)，胰蛋白酶(Sigma)。酶标仪(BIO-TEK，美国)，流式细胞仪(贝克曼库尔特，美国)，高速离心机(金坛市医疗仪器厂，中国)，凝胶成像分析系统(UVP，美国)

1.2 方法

1.2.1 大鼠PASMCs制备与分组 大鼠PASMC原代分离、培养方法采用组织块贴壁法［3］，50 mL培养瓶常规细胞培养PASMC至亚融合状态，0.5 mL 0.25%的胰蛋白酶消化，显微镜下观察细胞部分脱壁时，即加含有10%小牛血清的培养基终止消化，吹打制成单细胞悬液，以血细胞计数板计数细胞，调整PASMC悬液浓度为1×104/mL，以每孔100 μL接种于96孔培养板，待细胞贴壁生长后，弃原培养液，PBS洗2次后分组(见表1)。

表1 实验分组设计

5-HT+Flu组另分为5 个亚组:A、B、C、D、E，各亚组中分别加入 Flu终浓度为 5、10、20、40、80 μg/mL的培养液100μL，每组设6个复孔，连续培养24、48、72 h，根据细胞生长情况，每24 ～48 h 左右换培养液1次。……