张敦伟，熊永忠，远立国，贾 坤，张桂红*，李守军*

(1.华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江 哈尔滨 150069)

犬流感(Canine influenza，CI)是由CI病毒(CIV)引起的以犬体温升高、咳嗽、流涕、喷嚏等呼吸困难为特征的呼吸道传染病，犬发病后易混合、继发感染其他病毒性和细菌性疾病。2006年本实验室在我国华南地区分离到了CIV，序列比对结果显示与韩国2007年分离的H3N2亚型CIV相似性较高，亲缘关系较近[1]，即为禽源性的流感病毒。这预示犬将成为流感病毒的一种新的宿主，经进一步的动物实验证实，幼龄和纯种犬对H3N2 CIV易感，临床症状明显；成年和当地土种犬不易感染或呈隐性感染，并且普遍呈现低死亡率的特点。

CIV属于正粘病毒科流感病毒属，病毒基因组为分节段单股负链RNA，编码至少10种病毒蛋白，其中血凝素(HA)糖蛋白，有亚型特异性，是该病毒最重要的表面抗原，不仅具有诱生中和抗体的能力，而且可刺激机体产生细胞毒性T淋巴细胞反应。HA的三维结构是由3个血凝素蛋白聚合在一起形成的三聚体，呈头茎结构，头部由以不平行β折叠的HA1亚单位组成，为受体结合位点和抗原决定簇[2]。因此，本研究通过表达具有抗原性的H3亚型CIV的HA1蛋白，用于H3亚型CIV的检测。

1 材料和方法

1.1 试验材料 CIVA/canine/guangzhou/01/2006(H3N2)株(CGZ1株)、该株病毒人工感染犬的阳性血清及阴性犬血清由本实验室分离与保存。TRIzol试剂、ExTaqDNA聚合酶、T4 DNA连接酶、反转录酶、EcoRⅠ、HindⅢ和DNA Marker均购自TaKaRa公司；质粒小量抽提试剂盒购自OMEGA公司；……