王雪峰，王 帅，韩秀娥,3，林跃智，姜成刚，吕晓玲，赵利平，王凤龙，周建华*

(1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物重点实验室/大动物病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001；3.东北农业大学黑龙江省乳品工业技术开发中心，黑龙江 哈尔滨 150001)

20世纪70年代我国科学家将马传染性贫血病毒 (Equine infectious anemia virus， EIAV)强毒株EIAVLN40致弱，获得了马传染性贫血弱毒疫苗。在疫苗制备过程中形成了一系列生物学特性不同的病毒株[1]，对这些病毒株的基因组进行分析，便于研究EIAV弱毒疫苗减毒和诱导免疫保护机理。

EIAV的表面蛋白gp90是病毒与靶细胞受体结合的主要区域，同时也是影响病毒毒力和刺激机体产生免疫保护的主要成分，因此，gp90成为对EIAV基因组进化分析研究的主要靶基因[2-4]。本实验对马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗株EIAVDLV121、EIAVLN40和疫苗的亲本病毒株EIAVDV及EIAVDV在驴白细胞内传代过程中的3个中间代次病毒(EIAVDLV32、EIAVDLV62和 EIAVDLV92)的 gp90基因序列进行分析，研究EIAV弱毒疫苗致弱过程中gp90的进化特点，利于进一步探讨马传贫弱毒疫苗的减毒机制。

1 材料和方法

1.1 病毒株 EIAVLN40、EIAVDV、EIAVDLV120及EIAVDLV31、EIAVDLV61和EIAVDLV91病毒株均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所慢病毒组保存。

1.2 主要试剂 小量DNA胶回收试剂盒和LA-Taq DNA聚合酶均购自TaKaRa公司；Blood DNA Kit(D3392-01)购自OMEGA公司。

1.3 病毒制备与核酸的提取 按照Blood DNA Kit说明书，由EIAVLN40和EIAVDV感染的发热期马匹外周血中提取基因组DNA。按文献[5]方法培养原代驴白细胞，分别接种1 mL EIAVDLV31、EIAVDLV61、EIAVDLV91和EIAVDLV120驴白细胞培养种毒，用100%成牛血清培养，待细胞病变时收获细胞，提取基因组DNA。……