赵 伟，李传峰，陈宗艳，刘光清*

(1.中国农业科学院上海兽医研究所国家家禽工程技术研究中心，上海 200241；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100)

Ⅰ型鸭病毒性肝炎(Duck Virus Hepatitis，DVH)是由Ⅰ型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virusⅠ，DHV-Ⅰ)引起的，以肝脏出血、肿大和高死亡率为特征的急性接触性传染病。该病主要感染5周龄内的雏鸭，是对养鸭业威胁较大的传染病之一。DVH最早由美国学者Levine报道并分离病原[1]。随后，一些欧洲和亚洲国家和地区也相继报道该病疫情。1958年，中国首次报道DVH疫情，但是直到1984年才完成病原的鉴定[2]。目前该病已遍及中国大部分鸭养殖地区。

根据DHV-Ⅰ的形态学特征，国际分类委员会将其化归于小RNA病毒科的未定属，并于2006年完成对其基因组的测定[3-4]。研究表明，DHV-Ⅰ基因组为单股正链RNA分子，全长约7690 nt，由5'和3'端非编码区(UTR)和一个开放阅读框(ORF)组成，推测DHV-Ⅰ的表达可能是首先翻译出一个多聚蛋白前体，再经自身编码的蛋白酶裂解形成VP1、VP3、VP0、2A1、2A2、2B、2C、3A、3B、3C和3D等成熟蛋白[4-5]。但迄今尚无试验支持该预测结果，而关于DHV-Ⅰ的表达和调控机制的研究也尚属空白。本研究在对DHV-Ⅰ5'UTR进行序列分析的基础上，利用基因重组及定点突变等方法对5'UTR的结构和功能进行分析和研究，为深入开展DHV-Ⅰ的表达和调控机制奠定基础。

1 材料和方法

1.1 重组质粒和细胞 重组质粒pIRES-RED-eGFP、pGEM-CAT-LUC、pGEM-CAT-EMCV-LUC以及含有DHV-Ⅰ全长cDNA的重组质粒pBlDHV均由本实验室构建并保存；BHK-21细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。

1.2 主要试剂 Lipofectamine购自Invitrogen公司；TNT®Quick Coupled Transcription/Translation Systems和Transcend Non-Radioactive Translation Detection Systems试剂盒购自Promega公司；鼠源eGFP抗体和HRP标记的羊抗鼠抗体均购自上海威奥生物科技有限公司；……