石 敏，田明星，王远萍，邹年莉，林 艳，余 冲，赵芳芳，李 敏，黄 勇,2*

(1.四川农业大学动物医学院，四川 雅安 625014；2.四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 雅安 625014)

J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J，ALV-J)是上世纪80年代末Payne等首先从商品代肉鸡中分离鉴定的一种新的亚群ALV，是一种外源性ALV与禽内源性反转录病毒囊膜(E51)的重组体，不同于ALV的A、B、C、D、E亚群，它感染肉鸡后，可引起鸡只发生骨髓样细胞瘤和其它肿瘤性疾病[1-2]。近3年来，ALV-J的感染在我国蛋鸡及地方品种鸡中有加重趋势[3-4]，血管瘤型白血病的比例有所增加，发病率一般为5%～10%(以皮肤有血管瘤统计)[5]。ALV-J在我国现已广为流行，但在四川省却未见该亚群病毒株的分离报道。ALV-J四川株SCMS1的分离，为该病地方流行病学调查和防制提供实验依据。此外，囊膜(env)基因的扩增、克隆和核酸序列测定分析，对揭示该病毒的变异趋势具有一定意义。

1 材料和方法

1.1 病料来源与处理 2009年从四川某祖代种鸡场疑似J亚群禽白血病鸡采集血液用于病毒分离。

1.2 主要试剂 TRIzol、M-MLV反转录试剂盒购自Invitrogen公司；PCR反应试剂和DNA Marker等购自天根生化科技(北京)有限公司；pMD19-T载体购于宝生物工程(大连)有限公司。

1.3 引物设计与合成 根据参考文献[6]设计用于检测ALV-J的特异性引物，扩增片段大小约为545bp。引物序列如下：上游引物为H5：5'-GGATGAGGTG ACTAAGAAAG-3'；下游引物为 H7：5'-CGAACCA AAGGTAACACA CG-3'。设计一对重叠引物，用于env基因及E元件的PCR扩增。P1/P2扩增片段大小为1921 bp， P3/P4扩增片段大小为968 bp。引物序列如下：上游引物为P1：5'-ACTCTAAGAAGA AGCCGCC-3'；下游引物为P2：5'-CGATTCGCAAG TTTCTACC-3'；上游引物为P3：5'-GTTTGCCTTGC TTGTCATAG-3'；上游引物为 P4：5'-CAGGTGCTC GTAGTTGTCA-3'。引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成。……