郑 烈 叶丙霖

(甘肃省中医院，甘肃省兰州市七里河区安西路 518号，730050)

1 材料和方法

1.1 实验动物、分组与模型的制备 SPF级 Wistar大鼠 50只，雌雄各半，体重 200±20g。购于甘肃中医学院动物实验中心(实验动物质量合格证编号:SCXK(H)2004-0006-0000005)，动物饲料由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。参照文献[1]，实验动物随机分为 5组，每组 10只，雌雄各半，分为空白组、模型组、关节炎丸大剂量组、关节炎丸小剂量组、雷公藤阳性对照组。模型的制备用 75%乙醇对大鼠右足跖进行消毒，将弗氏完全佐剂 0.1mL/只，注射于大鼠足跖皮下。空白组大鼠注射生理盐水 0.lmL/只。

1.2 实验药品与试剂 关节炎丸由制附片、制川乌、细辛、白芍、桂枝、黄芪、甘草等药物组成，具有补益气血、温肾养肝、健脾除湿的功效。为棕褐色颗粒，由甘肃中医学院附属医院制剂室提供。雷公藤多甙片(湖南协力药业有限公司，生产批号:Z43020138)，弗氏完全佐剂由美国 Sigma公司生产。

1.3 给药方法 参照文献[2]，根据人和动物间体表面积的换算关系，取关节炎丸浓煎液，按生药量计算为7.2g/mL，每天关节炎丸大剂量组给予 3mL/只、关节炎丸小剂量组给予 1.5mL/只、空白组和模型组均给予生理盐水 1mL/只，雷公藤多甙片组给予雷公藤多甙片6.3mg/kg每天。给药至实验结束。

1.4 测定方法 关节肿胀度采用玻璃容器排水法测量:首先在每只大鼠的踝关节下做一标记。其次向内径 2cm的 20mL量筒内注入纯净水，液面与量筒最高刻度平齐。用最小刻度为 0.1mL的 5mL注射用针管吸取量筒内纯净水约 3mL。再把大鼠足跖缓缓伸入量筒内，使标记与量筒最高刻度平齐。再用已吸入 3mL水的针管向量筒内慢慢注入水液，使液面再次与最高刻度及标记平齐。从注射器上的刻度处读出其内部剩余液体体积，即为大鼠的足趾体积。重复 2次取均值。实验开始后每日用上述方法对各组大鼠足跖体积测量一次，并做记录。关节病理检查采用常规石蜡包埋、切片、HE染色后光学显微镜观察。

1.5 统计学方法 实验数据以 ¯x±s表示，采用SPSS13.0统计程序进行单因素方差分析，组间比较选用 LSD及 SNK分析。

表1 各组大鼠右后足跖肿胀度的比较(¯x±s)

表 2(续表 1) 各组大鼠右后足跖肿胀度的比较(¯x±s)

表 3(续表 1) 各组大鼠右后足跖肿胀度的比较(¯x±s)

图1 各组实验大鼠右足跖体积变化曲线

2 结果

2.1 各组大鼠关节肿胀度的比较 结果见表 1、表 2、表 3及图 1。

2.2 关节病理 取右后足跖关节经 EDTA脱钙后，选取相同部位的关节组织，用 10%甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，在光学显微镜下观察，病理结果与大多文献报道相符合[3]。空白组:软骨表面光滑，基质呈均质状，软骨细胞排列层次清楚。模型组:可见大量炎性细胞浸润，软骨有不同程度缺损，部分深达软骨下骨，缺损区内有肉芽组织，滑膜血管增多，软骨细胞排列不规则，基质分布不均。大剂量组:可见滑膜血管显著减少，软骨表面基本光滑，基质较为均匀，软骨细胞排列层次清楚，未见明显的软骨及软骨下骨质破坏。小剂量组:可见滑膜细胞有不同程度的增生，软骨表面不光滑，基质分布基本均匀，软骨细胞排列层次较清楚。雷公藤组:可见软骨表面不光滑，基质分布基本均匀，部分软骨细胞出现堆积、坏死，滑膜内炎性细胞浸润及血管炎表现均显著减轻。

3 讨论

本实验借助佐剂型关节炎大鼠模型来探讨关节炎丸对关节肿胀度和病理改变的影响。由表 1及图 1可以看出:造模后第 1日，造模各组大鼠右足跖开始出现肿胀，其体积与空白组对照有极显著性差异(P＜0.01)。模型组大鼠在造模后右足跖体积迅速肿胀，随后又逐渐减轻，6d后再度肿胀，此则为继发性炎症反应，20d左右达到高峰。此时其他症状则表现为对侧和前足肿胀，且进行性加重，行动不便，耳和尾部出现关节炎小结，体重较空白组增长明显缓慢，这些表现接近人 RA。给药各组在给药一周后足跖体积开始逐渐、持续下降，其足跖体积在第 23d时与模型组比较已有明显差异(P＜0.05)，说明各组治疗药物均有效。而且关节炎丸大剂量组治疗效果比小剂量组和雷公藤组明显;在 25d后其体积与空白组比较已无显著差异(P＞0.05)，说明其炎症已基本接近正常;在第 29d时与其他 2个治疗组比较已有明显差异(P＜0.05)，说明关节炎丸大剂量组治疗效果明显优于小剂量组与雷公藤组，表明关节炎丸能显著抑制大鼠的足跖肿胀度。俞小芬等[4]研究表明，关节炎丸可通过抑制细胞因子TNF-a、IL-1的增加，从而改善关节炎症的红肿疼痛。病理形态学也显示关节炎丸较雷公藤对照组能明显抑制佐剂型关节炎大鼠关节滑膜的炎症，抑制滑膜破坏及血管翳生成，防止骨关节畸形发生。这些实验结果进一步佐证了关节炎丸对类风湿关节炎的治疗作用，为进行临床试验研究提供了实验依据。今后应当从关节的微观入手，深入探讨关节炎丸治疗类风湿性关节炎的内在机制。

[1]徐淑云.药理实验方法学[M].第二版.北京:人民卫生出版社，1991:723-724.

[2]章元沛.药理学实验[M].第二版.北京:人民卫生出版社，1982:238.

[3]章敏，赵映前.热痹颗粒剂治疗类风湿关节炎的作用机理研究.中成药，2006，28(12):1787.

[4]俞小芬，薛盟举，郑烈.关节炎丸对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的实验研究.世界中医药，2008，3(2):113.