猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备
2011-05-10刘肖萍张志远刘玉松徐红运张凤华夏平安崔保安
刘肖萍,张志远,刘玉松,赵 琳,范 旭,徐红运,张凤华,夏平安,崔保安
(河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002)
Fc受体(FcR)是特异亲和免疫球蛋白(Ig)Fc片段的细胞表面分子,广泛表达于效应细胞和免疫辅助细胞表面[1],属于 Ig基因超家族成员.Fc受体通过与Ig Fc区域结合,参与Ig介导的生理功能或病理损伤过程,它不仅赋于免疫细胞杀伤病毒与细菌、清除免疫复合物、溶解癌变细胞的能力,而且参与免疫反应的启动与调节,在免疫防御中发挥非常重要的作用[2].
人的 FcγR 有 FcγRI,FcγRII,FcγRIII共3 个亚群,小鼠的 FcγR 有 FcγRI,FcγRII,FcγRIII,FcγRIV共4个亚群,每一个亚群都存在几种亚类和不同的RNA剪接异构体.FcγR在功能上可以分为活化性受体和抑制性受体.前者大都通过偶联含有免疫受体酪氨酸激活基序ITAM的γ二聚体传递活化信号;后者则主要通过自身分子胞浆区的免疫受体酪氨酸抑制基序ITIM传导抑制信号.FcγRIIB作为目前唯一发现的抑制性FcγR,在天然免疫和适应性免疫反应的负性调节方面发挥重要作用[3].从猪体内分离到的 Fc 受体有 FcγRI,FcγRII,FcγRIII 3 个亚群[4~6].猪的 FcγRIIB(swFcγRIIB)氨基酸序列与人、鼠的相比较,有高度的同源性,胞内区都含有1个保守的ITIM抑制基序.推断猪FcγRIIB可能有相似的抑制功能[5].QIAO 等[5]克隆并鉴定了swFcγRIIB受体,其胞外区含有 2个 Ig结构域(EC1,EC2).刘玉松等[7,8]随后发现其存在 RNA剪接异构体 swFcγRIIB1(GenBank accession No.FJ608551),与 swFcγRIIB受体相比,胞内区有57个碱基的插入,为了进一步研究swFcγRIIB1各结构域的生物学功能及其免疫调节机制,本研究表达了 swFcγRIIB1 胞外区 swFcγRIIB1-EY,EC1 结构域swFcγRIIB1-AY 和 EC2结构域 swFcγRIIB1-BY 融合蛋白.并对表达蛋白进行纯化,用3种……
