刘新艳，余清声，王桂平，余红娥，朱 柳，袁 牧，楼晓华，腾脉坤

(1.广州医学院药物研究中心，广东 广州 510182;2.广州医学院 护理学院，广东 广州 510182;3.广东药学院 中山校区，广东 中山 528458;4.中国科学技术大学 生命科学院，安徽 合肥 230026)

血管生成(angiogenesis)是指从已存在的血管周围发展出新的毛细血管的过程，被认为与肿瘤的发生、发展和转移密切相关[1]。内皮细胞是构成血管的主要成分，抑制内皮细胞凋亡，促进内皮细胞存活被认为是血管生成过程中的基本机制，越来越多有关血管生成抑制剂的研究证据表明，血管内皮细胞的凋亡可以促使肿瘤血管的退化，抑制肿瘤的生长与转移[2]。本课题组从中华眼镜蛇毒中分离提纯出一种相对分子质量(Mr)约为8000，等电点为7.5的单一活性组分，命名为中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor，CCVAF)。前期研究已经证实CCVAF能够选择性抑制内皮细胞增殖[3]，抑制肺癌细胞诱导的内皮细胞迁移[4]，诱导内皮细胞凋亡[5]以及同时具有在体外抑制血管生成的作用[6]，为进一步探讨其产生这种作用的机制，本文研究了CCVAF作用后牛肺主动脉血管内皮细胞(bovine arteria pulmonalis vascular endothelial cells，BAVEC)Bcl-2、caspase3 等相关蛋白的表达，探讨了CCVAF诱发内皮细胞凋亡及抑制血管生成的可能机制。

1 材料和方法

1.1 CCVAF的制备及活性鉴定

中华眼镜蛇毒原毒通过CM-Sepharose、Protein-PakTM SP柱后得到单一组分CCVAF，CCVAF的纯度应用SDS-PAGE测定，在浓缩电压为80 V，分离电压为120 V的条件下，经5%的浓缩胶，15%的分离胶，用考马斯亮蓝染色，证实其为单一条带，Mr为8000。pH试纸法测定等电点7.5，溶血实验结果表明没加卵磷脂和加卵磷脂都不存在溶血活性，表明CCVAF不存在直接和间接溶血活性(此部分实验由中国科技大学生命科学院完成)。……