崔晓雪，顾 晔

(华中科技大学 同济医学院 附属普爱医院 心内科，湖北 武汉 430034)

原发性高血压是引起动脉粥样硬化的常见原因，以往认为内膜损伤是动脉粥样硬化性病变的基础，外膜仅起支持、营养作用。但近年研究发现，对损伤反应活跃的细胞绝大多数存在于血管外膜，其中成纤维细胞的表型转化在高血压动脉粥样硬化中发挥重要的作用[1]。本研究观察银杏叶提取物(GBE)对自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats，SHR)血管外膜成纤维细胞表型转化的影响，为临床防治动脉粥样硬化提供实验依据。

1 材料

GBE注射液(金纳多，每支5 mL，含 GBE 17.5 mg;批号:2007122721)，德国威玛舒培博士药厂;DMEM培养基，Gibco公司;胎牛血清，Costar公司;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、胰蛋白酶，Sigma公司;α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体，武汉博士德生物工程有限公司。

FACSVantageSE型流式细胞仪。

清洁级SHR，雄性，8周龄，体重(200±10)g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号:SCXK(沪)2007-0005。

2 方法

2.1 细胞培养及分组

SHR 6只，用大鼠尾动脉血压计测定大鼠尾动脉收缩压，血压均达到21.3 kPa以上。常规处死，取胸主动脉，去除血管周围组织，分离出血管外膜。剪成1 mm3组织块，平铺于25 mL培养瓶底，翻转使瓶底在上，向培养瓶内添加含有20% 胎牛血清的DMEM培养基3 mL，放入细胞培养箱贴壁4 h，之后小心翻转培养瓶使贴壁细胞浸于DMEM培养基中继续培养。每2 d换液一次。5～7 d后待细胞达80%融合时用含0.02%EDTA的胰酶消化传代，采用差速贴壁法纯化成纤维细胞，第4～6代细胞用于试验。细胞分为对照组，GBE 25，50，100 mg/L剂量组，每组均为6个样本，每瓶细胞培养体积3 mL。各组先给予终浓度为10－6mol/L的 AngⅡ刺激30 min，再分别换为含不同浓度GBE(终浓度分别为25，50和100 mg/L)的DMEM培养基共培养24 h。……