游 莉，徐兰兰，郭元元，邹正渝，黎玉叶，孙双双，罗进勇，周 兰

(重庆医科大学 医学检验系 临床检验诊断学，教育部重点实验室，重庆 400016)

S100蛋白是一类具有EF-手型的钙调蛋白，具有多种细胞内外的生物学功能;S100A9为该家族成员之一，是由嗜中性粒细胞和巨噬细胞在微生物成分或细胞因子刺激时分泌的促炎性蛋白，主要与S100A8以异源二聚体的形式发挥作用[1]。作为免疫原性蛋白，其高表达于各种炎性疾病和肿瘤微环境，具有促炎症扩散、抗菌、抑制多种正常细胞(巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞等)和肿瘤细胞(乳腺癌细胞、淋巴瘤细胞、白血病细胞等)生长的活性[2];但是，目前也有研究表明，其能产生骨髓起源的抑制细胞(MDSCs)，从而促进肿瘤产生免疫逃逸[3]。上述研究提示S100A9在人体多种疾病如炎症、肿瘤中发挥着重要作用，但其作用机制还有待进一步探讨。

本实验利用基因重组技术将hS100A9基因插入原核表达载体pGST-moluc，并在大肠杆菌BL21中诱导表达，再用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(Glutathione Sepharose 4B beads，GS4BB)分离纯化出高纯度的 GST-hS100A9融合蛋白，为进一步研究hS100A9蛋白的功能及其作用机制奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料

pGST-moluc、pHAHA-hS100A9质粒由美国芝加哥大学医学中心分子肿瘤研究室馈赠;PCR引物由Takara公司合成;高保真PCR、普通PCR、DNA连接试剂盒、限制性内切酶 BamHⅠ和 HindⅢ 购自Takara公司;胶回收、DNA纯化试剂盒购自Omega公司;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)购自 Bio Basic Inc;预染的蛋白质相对分子质量(Mr)标准购自Fermertans;丙烯酰胺、还原型谷胱甘肽购自Amresco;GS4BB购自Amersharm Biosciences;hS100A9抗体购自SANTA CRUS公司;BCA蛋白测定试剂盒购自Beyotime;CCK-8试剂盒购自Dojindo公司。……