魏 玲，李苏宜，孙三元，袁保兰，孙 丽

(1徐州市中心医院，江苏徐州 221009;2东南大学附属中大医院)

Bmi-1基因广泛表达于多种类型干细胞，参与造血干细胞和神经干细胞的自我更新，高表达 Bmi-1蛋白细胞被认为是肿瘤中存在的肿瘤干细胞[1]。本研究通过免疫组化方法检测 Bmi-1蛋白在食管鳞癌组织中的表达，并探讨其与食管鳞癌化疗疗效的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集徐州市中心医院 2002～2008年保存的食管鳞癌石蜡标本 30例，病例均经病理学确诊，术后均出现复发转移。给予铂类药物联合方案化疗，化疗后完全缓解 +部分缓解 11例(CR+PR组)，稳定 9例(SD组)，进展 10例(PD组)。

1.2 方法 每个蜡块取 4μm厚连续切片做免疫组化染色。先将切片置于二甲苯中脱蜡，乙醇梯度水化处理，柠檬酸缓冲液抗原煮沸修复，滴加鼠抗人Bmi-1单克隆抗体(1∶50，英国 Abcam公司)，37℃孵育1 h，滴加二步法免疫组化检测试剂山羊抗小鼠IgG抗体-HRP多聚体(北京中杉公司)，DAB显色，苏木精复染，盐酸乙醇固定，封片、观察。用 PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 结果判断 Bmi-1蛋白阳性表达主要表现为细胞核内呈现棕黄色或者棕褐色颗粒。高倍镜下随机取 4个不同的视野，计数细胞总数及核阳性细胞数，按阳性细胞所占的百分比计分。阳性细胞率≤10%为 1分，＞10% ～≤50%为 2分，＞50% ～≤75%为 3分，＞75%为 4分。同时，根据染色的强弱程度计分。阴性染色 1分，弱染色 2分，中等强度染色 3分，强染色 4分。根据阳性细胞率和染色强弱计分的乘积判断结果:≤4为(-);＞4～≤8为(+);＞8～≤12为(++);＞12～≤16为(+++)。统计分析时(-)和(+)合计为阴性表达，(++)和(+++)合计为阳性表达。以上结果均至少由两位病理科医生以双盲法观察确定。……