张海元,张 静 (长江大学医学院,湖北荆州434023)

刘康兵 (石首市中医医院肿瘤科,湖北石首434400)

药物SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)是广谱型组蛋白去乙酰化酶抑制剂 (HDACI),对组蛋白去乙酰化酶 (HDAC)有明显的抑制作用,能通过细胞周期阻滞、诱导分化和凋亡等机制抑制肝癌细胞生长。顺铂 (cisplatin,DDP)是临床应用最为广泛的一种抗癌药物,铂类药物的主要作用机制是通过损伤DNA,使细胞进入G1期生长抑制,并诱导损伤严重的细胞进入凋亡状态[1]。但顺铂副作用较大,顺铂用量增大容易引起骨髓抑制及肾功能严重损害,另外顺铂使用剂量趋近于亚致死剂量时易引起耐药性,使得顺铂应用于肝细胞癌的治疗效果并不理想,故减少顺铂的使用剂量、增强顺铂抗肿瘤细胞活性显得十分重要。通过本项目的组蛋白去乙酰化酶抑制剂药物SAHA与低剂量顺铂联合应用对增强肝癌细胞HepG2凋亡作用及机制的探讨,有望获得全新的联合抗肝癌的药物治疗方案。

1 材料与方法

1.1 材料

肝癌细胞HepG2由武汉大学馈赠,细胞接种于含10%新鲜牛血清和抗生素的DMEM培养基中传代培养,DMEM培养液及二甲亚砜 (DMSO)购自美国GIBCO公司。DDP购于锦州九泰药业公司,去组蛋白乙酰酶抑制剂SAHA由英国阿斯利康公司提供。

1.2 方法

1.2.1 HepG2细胞培养 将肝癌细胞HepG2接种于含10%新生牛血清和抗生素的DMEM培养基中,置于5%CO2及饱和湿度的37℃培养箱中培养。利用0.125%的胰蛋白酶消化传代,1～2d换液一次。

1.2.2 显微镜观察细胞形态 将细胞HepG2接种于12孔细胞培养板,设对照组、SAHA(2.5μ mol/L)组、DDP(6.25μ g/ml)组及SAHA+DDP联合治疗组。待细胞贴壁后分别加药处理,每相隔6h,利用相差倒置显微镜观察各组培养孔内细胞贴壁生长及形态的变化情况。……