康 建,屈凌波,吴拥军,曾建伟

(1.郑州大学第一附属医院,河南郑州 450052;2.郑州大学化学系,河南郑州 450052;3.郑州大学公共卫生学院,河南郑州 450052;4.福建中医药大学中西医结合学院,福建福州 350108)

决明子(Semen Cassiae)为豆科植物决明(Cassia obtusifolia L.)或小决明(Cassia tora L.)的干燥成熟种子,具有清热明目、润肠通便的功效,主治目赤涩痛、羞明多泪、头痛眩晕、目暗不明、大便秘结[1]。现代研究发现,决明子具有降血压[2]、降血脂[3-4]和泻下[5]等作用,其主要活性成分为蒽醌类物质[5-6]。本研究通过建立紫外可见分光光度法测定决明子中总蒽醌的含量,为评价药材质量及保证临床疗效提供依据。

1 仪器与试药

UV-1800型紫外可见分光光度计,日本岛津公司产品;DFY-600高速中药粉碎机,温冷市林大机械有限公司产品;CP225D电子天平,德国赛多利斯公司产品;1,8-二羟基蒽醌对照品,批号0829-9702,中国药品生物制品检定所(含量测定用)产品;乙酸镁、甲醇、氯仿、盐酸等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备

取 1,8-二羟基蒽醌对照品适量,加甲醇配制成浓度为0.1 g/L对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液制备

取决明子粉末(过40目筛)1.0 g,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声提取30 min,加甲醇补足减失的重量,精密量取上清液2 m L,于10 m L具塞试管中,置水浴上蒸干;冷却后,残渣加5mL蒸馏水溶解,加20%盐酸5m L,于沸水浴中加热水解 2 h,冷却至室温,倾入分液漏斗中,用氯仿提取 3次,合并氯仿液并回收至干。残渣用0.5%醋酸镁甲醇液溶解,并稀释至10mL,即得。

2.2 测定波长的选择

在400～650 nm波长处对1,8-二羟基蒽醌对照品溶液吸光度进行扫描,结果在512 nm波长处有最大吸收,因此选择 512 nm作为测定波长,见图 1。

图1 1,8-二羟基蒽醌对照品溶液吸光度扫描图

2.3 标准曲线绘制

精密吸取 1,8-二羟基蒽醌对照品溶液 0.2, 0.5,0.8,1.2,1.6,2.0 mL于10 m L具塞试管中,水浴蒸干,残渣加0.5%醋酸镁甲醇溶液溶解至刻度,摇匀。以0.5%醋酸镁甲醇溶液为空白,于512 nm波长处测定其吸光度,以吸光度对质量作图,绘制标准曲线。得回归方程:Y=0.004 6X-0.003 2,r= 0.999 8(n=6)。

2.4 精密度试验

取1.0 mL对照品溶液,按标准曲线绘制方法,依次连续测定6次,吸光度RSD=1.03%。

2.5 稳定性试验

取同一样品溶液,每隔 1 h测定 1次,共测6次,吸光度RSD=1.55%。结果表明,供试品溶液的稳定性较好。

2.6 重复性试验

取同一批样品,按“2.1.2供试品溶液制备”项下的方法制备 6份供试品溶液,测定吸光度,计算样品中总蒽醌平均含量为0.405%,RSD=1.96%。

2.7 加样回收率试验

取本品粉末 6份,每份 0.5 g,精密称定,每份加入对照品溶液2 mL,按“2.1.2供试品溶液制备”方法制备,测定吸光度,计算回收率平均值为100.1%,RSD=2.64%。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.8 样品含量测定

取决明属不同种的样品约1.0 g,每个品种均取3份,按“2.1.2供试品溶液制备”项下的方法制备,经测定,结果见表 2。

表2 不同种决明子总蒽醌含量测定结果

3 讨 论

3.1 总蒽醌类型初探

研究发现,决明子未水解前,几乎检测不到蒽醌;经酸水解后,方可检测到总蒽醌,这表明决明子中的蒽醌类物质主要为结合型,而游离型含量甚微。

3.2 供试品溶液的制备方法

由于决明子中的蒽醌类物质主要为结合型蒽醌,检测决明子中总蒽醌的含量,必须先进行水解反应,一般用 20%盐酸,试验发现加三氯化铁溶液会加速水解反应的速度和程度。

3.3 总蒽醌含量差异

药典只收录了决明属的 2个品种,分别是豆科植物决明Cassia obtusifolia L.和小决明Cassia tora L.,但市场上伪品较多。本文测定了 7个常见品种的决明子样品,结果表明总蒽醌含量差异较大。其中,药典收载品种的总蒽醌含量较高,而非药典品种有 2个品种的总蒽醌含量较低、3个品种含量极低。因此,为保证药品的安全有效性,选用决明子时应使用药典收载的品种。

[1]国家药典委员会.中国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:135-136.

[2]毛万姮,商黔惠,刘爱东,等.决明子提取物对大鼠主动脉扩血管作用的机制[J].中华高血压杂志,2010,18 (1):60-64.

[3]张加雄,万丽,胡轶娟,等.决明子降血脂有效部位的研究[J].时珍国医国药,2006,17(6):904-905.

[4]俞发荣,连秀珍,王小琦,等.决明子不同部位提取物的调血脂作用[J].中国临床康复,2006,10(39):110-112.

[5]张加雄,万丽,胡轶娟,等.决明子提取物泻下作用研究[J].时珍国医国药,2005,16(6):467-468.

[6]张加雄,万丽,王凌.决明子降血脂有效部位的化学成分[J].华西药学杂志,2008,23(6):648-650.