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大剂量放疗后豚鼠内耳螺旋神经节细胞Caspase 3的表达*

2011-03-13谢利红唐安洲尹时华谭颂华

天津医药 2011年6期
关键词:实验

谢利红 唐安洲 尹时华 谭颂华

放射治疗是头颈部恶性肿瘤的主要治疗手段。在放射治疗中,患者的内耳、听神经和部分脑干均包括在照射野内[1]。60Co辐射导致感音神经性耳聋为其常见的并发症,严重影响患者的生存质量。Caspase 3是近年来发现的类半胱氨酸蛋白酶家族成员之一,是细胞凋亡中的关键蛋白酶,单独或协同参与水解与凋亡有关的蛋白质[2]。本文旨在研究Caspase 3在螺旋神经节细胞(SGC)中的表达,对放疗后螺旋神经节细胞(SGC)的损伤情况进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 实验动物 白化豚鼠40只,体质量250~350 g,普通级,购自湖南省长沙市开福区东创实验动物科技服务部,雌雄不拘。豚鼠自由饮水进食,室温23~26℃。全部实验动物用电耳镜检查无中耳感染,耳廓反应灵敏。随机分为5组,每组8只,右耳为放射组,左耳为对照组。

1.2 方法

1.2.1 照射方法 豚鼠用1%戊巴比妥钠(3.5 μL/g)麻醉固定后,用GWXJ80型60Co远距离治疗机对豚鼠右耳颞部做一次性60Co照射70 Gy,辐射深度2.0 cm,照射范围为2 cm×2 cm,源皮距80 cm,自制铅板遮盖非照射部位。

1.2.2 石蜡标本制备 实验动物于放疗后1、4、7、14和30 d用1%戊巴比妥钠(3.5 μL/g)麻醉后处死,经腹侧取听泡,暴露耳蜗并在蜗尖钻孔,推镫骨底板脱位,刺破圆窗膜,用4%多聚甲醛固定液灌流固定后,再放入固定液4℃固定24 h以上。用10%EDTA脱钙10~14 d,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,耳蜗中轴切片。

1.2.3 HE染色 石蜡切片脱蜡和水化,苏木精染液染色10 min,1%盐酸乙醇分色,流水冲洗后,自来水蓝化10 min,0.5%伊红染液染色1 min,依次经70%、85%、95%和100%乙醇脱水,二甲苯透明,封片。

1.2.4 免疫组……

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