胡占东 公 倩 朱铁虹 畅继武

白细胞介素（IL）-4是具有多种生物学功能的细胞因子。在细胞免疫和体液免疫中发挥重要作用。新近研究表明，IL-4与哮喘、肾脏疾病和肿瘤等疾病的发病机制密切相关[1-2]。但由于传统检测技术较复杂，研究IL-4与上述疾病的内在相关性存在困难。因此寻找一种快速而具有高度特异性的方法是研究IL-4的关键。噬菌体抗体库是在噬菌体展示技术的基础上建立起来的。该技术不经免疫，避免了杂交瘤技术繁琐过程，直接通过噬菌体展示人源抗体。本研究运用这一技术构建了大容量的人源噬菌体抗体元件库，并从中筛选得到IL-4-Fab抗体，为进一步解决IL-4抗体的表达与纯化，制备新型的检测试剂盒奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）试剂。RNA提取纯化试剂TRIzol购自Invit-rogen公司；逆转录试剂盒（Quantscript RT KIT），DNA聚合酶（2XTaq PCR Master Mix），质粒提取试剂盒，DNA凝胶回收试剂盒购自北京TIANGEN公司；T4 DNA连接酶和限制性内切酶SpeⅠ、XhoⅠ、SacⅠ和XbaⅠ购自TaKaRa公司；胰化蛋白胨和酵母提取物购自英国Oxoid公司，氨苄青霉素（Amp）、四环素（Tet）、卡那霉素（Kan）、Tween20、PEG8000，Tris碱、牛血清白蛋白（BSA）和IL-4均购自Sigma公司。（2）载体、宿主菌与辅助噬菌体。具有抗氨苄青霉素特性的噬菌粒载体pComb3XSS由美国Scripps研究所CarlosF.Barbas博士赠送。大肠杆菌XL1-Blue由本室保存。辅助噬菌体VCSM13含卡那霉素抗性基因，购自美国Stratagene公司。（3）PCR引物。参考美国Scripps研究所设计的一组引物[3]，由Invitrogen公司合成。

1.2 方法

1.2.1 重链Fd和轻链基因的获得 抽取来自天津市泌尿外科研究所18例健康成人外周血，分离淋巴细胞。每1×107细胞加入1 mL TRIzol充分裂解细胞，提取总RNA，琼脂糖凝胶电泳鉴定总RNA。……