马果果 张吉翔

肿瘤属于基因疾病，其生物学基础是基因的异常。DNA损伤若不能得到及时有效地修复，积累到一定程度可导致基因组不稳定性升高，从而引起细胞增殖和分化失控，导致肿瘤的发生[1]。XPD是哺乳动物基本转录因子ⅡH（TFⅡH）的核心亚单位之一，参与基因转录、核苷酸切除修复及细胞周期调控，并影响多种抑癌基因和癌基因的表达[2]。XPD过表达对肿瘤生长的影响已成为近年来研究的热点。本研究将野生型XPD基因转染入人肝癌细胞HepG2中，并检测XPD、p52及p21的表达，观察转染前后肝癌细胞的生物学变化。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌细胞HepG2购自美国模式菌种收集中心。重组质粒pEGFP-N2-XPD（XPD质粒）及胎中血清Fetal Bovin Serum（pEGFP-N2，N2质粒）由本实验室构建[3]。MEM培养基购自美国Gibco公司。胎牛血清（FBS）购自澳大利亚Hy⁃clone公司。Lipofectamine 2000TM、Trizol购自美国Invitrogen公司。M-MLV Reverse Transcriptase、Rnasin、dNTP、Oligo（dT）及N，N，N，N-四甲基乙二胺（TEMED）购自美国Promega公司。PCR引物购自上海生工生物工程有限公司。Tag PCR Master⁃Mix、Markr I购自北京天根生化科技有限公司。总蛋白提取试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司。单克隆抗体XPD、p52、p21购自美国Santa Cruz公司。异丙醇、氯仿、无水乙醇购自上海振华化工厂。DMSO（Dimethyl sulfide）、DEPC（Diethyl pyrocarbonate）购自美国Ameresco公司。Tris购自美国Roche公司。MTT购自上海普飞生物技术有限公司。

1.2 细胞培养及转染 HepG2细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养基中，于37℃、5%CO2孵箱中培养，以0.25%胰蛋白酶消化，2～3 d传代1次。根据细胞处理情况的不同分为3组：肝癌细胞无转染空白对照组HepG2、空载质粒转染细胞HepG2-pEGFP-N2组（N2组）以及重组质粒转染细胞HepG2-pEGFP-N2-XPD组（XPD组）。以2×105/孔的密度铺于6孔板内，24 h细胞铺满50%～80%，用脂质体2000进行瞬时转染。Trizol法提取细胞总RNA，合成cDNA。……