潘廷才 杨林杰 刘善文 李华荣 朱林燕 叶文才 王立伟 陈丽新

细胞凋亡早期的细胞容积减小称为凋亡性细胞容积减小（apoptotic volume decrease，AVD）。AVD是具有普遍性意义的细胞凋亡早期的标志性事件，是细胞凋亡的一个重要特征。目前关于AVD的发生机制尚不清楚，有报道称氯通道在AVD的发生过程中发挥着至关重要的作用[1]。笔者前期研究表明，抗肿瘤药物可通过激活氯通道引起AVD，继而诱导细胞发生凋亡而发挥其抗癌作用[2]。5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）是临床上常见的抗癌药，诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一[3]。氯通道在5-Fu诱导细胞凋亡中是否发挥作用目前尚不清楚。本研究旨在研究氯通道在5-Fu诱导的细胞凋亡中的作用，从离子通道和AVD的角度探讨5-Fu在细胞凋亡中的作用机制。

1 材料与方法

1.1 溶液及试剂 等渗灌流液（ISO）含70 mmol/L NaCl，0.5 mmol/L MgCl2，2 mmol/L CaCl2，10 mmol/L HEPES和140 mmol/L D-甘露醇。用D-mannitol调节至300 mmol/L。配好的液体用冰点计（Osmomat030，Gono2tec）检测溶液渗透压，用Tris液调pH值至7.4。5-Fu购自上海旭东海普药业有限公司，氯通道阻断剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）购自Sigma公司。用二甲基亚砜（DMSO）配制成100 μmol/L的储存液，使用前用灌流液稀释至100 mmol/L。

1.2 细胞培养 低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z用含10%小牛血清、1×105U/L青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI-1640生长液培养在37℃、饱和湿度、5%CO2的培养箱内，按常规方法传代。实验前用0.25%胰酶和0.02%EDTA进行消化传代，收集并重悬细胞，细胞悬液接种在直径22 mm的圆形玻片上，放入培养箱使细胞贴壁，待细胞贴壁1 h后进行实验。

1.3 细胞容积测量 分别用100 μmol/L 5-Fu（5-Fu组）、100 μmol/L 5-Fu+100 μmol/L NPPB（5-Fu+NPPB组）处理细胞，另外设未加任何处理因素的为对照组。采用笔者前期文献报道的方法测定细胞的容积[4]。……