于晓红,金 博,邱慧彬,付山峰,路 平

1.军医进修学院,北京 100853;2.海军总医院消化内科;3.海军总医院病理科

肝硬化是各种慢性肝病长期发展的终末期,严重威胁患者的生命[1]。我们在前期实验中发现门脉灌注Ⅳ型胶原酶可减轻硬化肝脏的纤维化程度[2],推测可能是由于胶原酶可直接降解细胞外基质,减轻纤维化。但这种方法对于HSCs激活是否存在影响目前尚不清楚。本实验观察门脉灌注Ⅳ型胶原酶对 α-SMA表达的影响,初步探讨Ⅳ型胶原酶对 HSCs激活的影响。

1 材料与方法

1.1 肝硬化动物模型制备 选择月龄为 3个月雄性新西兰大白兔[由北京科宇动物养殖中心提供,实验动物许可证号:SCXK(京)-2006-0015],体质量1.54～2.23 kg。取CCl4和橄榄油(均购自北京化学试剂公司),按体积比为 1∶1配制,充分摇匀,制备成浓度为50%CCl4备用。根据预实验结果实验组于臀部皮下注射50%CCl4(0.23mL/kg),每周2次,8周后根据兔饮食、体质量及精神状态,调整为每周 1～2次。对照组单纯应用橄榄油(0.23 mL/kg),皮下注射方法同实验组。12周末取动物观察肝脏的外观、体积、质地等变化,并取材做组织病理学检查。10%中性甲醛溶液固定48 h,石蜡包埋,切片后行苏木精-伊红(HE)染色及Masson染色,光学显微镜下观察肝脏组织的病理学改变。

1.2 门静脉插管手术 各组动物经氯胺酮及速眠新Ⅱ等比混合液肌肉注射(0.5 mL/kg)麻醉成功后,常规脱毛、消毒并铺洞巾,取上腹部正中切口打开腹腔,暴露肝脏,以缝扎方法切取部分右肝组织,10%中性甲醛固定用于病理组织学检查。暴露空肠肠系膜静脉,分离其终末支,剪一小口并结扎远心端,将一次性硬膜外麻醉导管(BD Epidural Catheter)沿该切口向近心端插入3～4 cm后结扎固定。……