雷 婷,刘理礼,韩 霜,郭雪艳,丁 杰

1.兰州军区乌鲁木齐总医院消化病中心,新疆乌鲁木齐 830000;2.第四军医大学唐都医院肿瘤科;3.第四军医大学西京医院消化病院全军消化病研究所肿瘤生物学国家重点实验室;4.陕西省人民医院消化内科

缺氧是实体瘤普遍存在的现象,多年来,人们对肿瘤组织缺氧重要性的认识来源于一个事实,缺氧细胞对治疗具有固有的耐受性。近年来不断有文献报道在例如结肠癌、前列腺癌、神经胶质瘤、睾丸癌等多种肿瘤细胞对阿霉素、铂剂、丝裂霉素和环磷酰胺等化疗药物发生了耐药[1-3]。本研究发现缺氧能够显著降低胃癌细胞对于多种化疗药物的敏感性,其主要是通过上调药物转运蛋白的表达及增加抗凋亡分子Bcl-2/Bax的比例实现的。

1 材料与方法

1.1 主要材料 人胃癌细胞系SGC7901引自军事医学科学院。鼠抗人p-gp、MRP、Bcl-2和Bax单克隆抗体购自Santa Cruz公司。细胞培养用1640培养液(Gibco公司),胎牛血清(浙江杭州四季青公司。RTPCR试剂盒(Promega),缺氧培养箱:Forma Scientific公司(1%O2,5%CO2,94%N2)。

1.2 M TT比色法 将待检细胞预先缺氧(1%O2)或常规培养 8 h,将化疗药物按不同浓度加入各孔细胞,继续缺氧或常规培养48 h;MTT呈色后,选择490 nm波长比色,计算胃癌细胞在缺氧和常氧条件下化疗药物不同浓度下的存活率。细胞存活率(%)=(实验组A值-空白对照组A值)/(阴性对照组A值-空白对照组A值)×100%。IC50的计算以细胞存活率为纵轴,药物浓度对数为横轴作半对数图,并按作图法求出胃癌细胞黏附于不同成分后对两种药物的 IC50值。

1.3 Annexin V/PI染色法 收获对数生长期的待检细胞,细胞贴壁后加入VCR,剂量为2.5 mg/L,37℃缺氧或常氧培养48 h;加入5μL的Annexin V-FITC后收集细胞,PI染液,流式细胞仪分析。……