郄会卿 董焕娥 刘翠清 王春秀

厄贝沙坦干预对DN大鼠炎性细胞因子的影响

郄会卿 董焕娥 刘翠清 王春秀

目的观察厄贝沙坦干预对炎性细胞因子白介素-6(IL-6)、IL-8、IL-10和C-反应蛋白(CRP)水平的影响，并从炎症方面探讨其可能的药物作用机制。方法 将36只Wistar大鼠随机分为右肾切除对照组(C组)、糖尿病肾病组(DN组)、厄贝沙坦治疗组(Irb组)3组，每组12只。第8、12周末收集大鼠血液标本，ELASA方法测定血液IL-6、IL-8、IL-10和CRP含量。结果 Irb组和DN组8周、12周的CRP、IL-6、IL-8均高于C组;而DN组8周、12周的CRP、IL-6、IL-8又高于Irb组(P ＜0.01)。Irb组和DN组8周、12周的IL-10均低于C组，而DN组8周、12周的IL-10又低于Irb组(P＜0.01);C组12周与8周的上述各指标无明显变化。结论 厄贝沙坦不同程度地抑制DN大鼠IL-6、IL8和CRP的产生，刺激IL-10的分泌，从而部分逆转炎性细胞因子和抗炎细胞因子的失衡，降低蛋白尿、抑制肾小球的硬化，而延缓糖尿病肾病的进展。

白介素-6;白介素-8;白介素-10;C-反应蛋白;糖尿病肾病;厄贝沙坦

糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见而严重的慢性微血管病变的并发症，是引起终末期肾病最常见的病因之一。厄贝沙坦作为血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，对DN有明确的治疗效果，可减轻肾脏肥大程度和减少蛋白尿，改善肾功能，但其确切机制尚不清楚。本实验旨在观察厄贝沙坦干预DN大鼠前后炎性细胞因子白介素-6(IL-6)、IL-8、C-反应蛋白(CRP)和抗炎细胞因子IL-10的变化，探讨厄贝沙坦对DN细胞因子的调节作用，探讨其可能机制。

1 材料与方法

1.1 动物模型及分组 健康Wistar大鼠36只，雄性，体重100～120 g，由河北省实验动物中心提供。将大鼠用戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔麻醉后行右肾切除术。2周后将大鼠随机分为3组，每组12只。即右肾切除对照组(C组)、糖尿病肾病组(DN组)、厄贝沙坦治疗组(Irb组)。C组只注射等量的枸橼酸缓冲液。DN组和Irb组采用一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)(65 mg/kg，溶于pH值4.5枸橼酸缓冲液中)诱导DN，于给药

后48 h测血糖，凡全血血糖≥16.7 mmol/L，尿糖+++～++++者确定为DN模型，实验期间动物自由进食饮水，不使用胰岛素及其他降糖药物。DN模型建成后，每周测血糖1次，不符合标准者弃去。Irb组给予厄贝沙坦50 mg·kg-1·d-1灌胃，1次/d，连续给药12周。C组和DN组只用等量0.9%氯化钠溶液灌胃。分别于厄贝沙坦干预第8、12周末每组取6只大鼠股动脉取血，分离血清，测IL-6、IL-8、IL-10和CRP。

1.2 试剂与方法 IL-6、IL-8、IL-10、厄贝沙坦购自美国Sigma公司，CRP购自利德曼生物工程股份有限公司。芬兰产Multisken Ascent型全自动酶标仪，日本产日立7170-A自动生化分析仪。CRP采用免疫比浊法，IL-6、IL-8、IL-10采用 ELASA酶免法。

2 结果

Irb组和DN组8周、12周的CRP、IL-6、IL-8均高于C组，除Irb组8周IL-8与C组差异无统计学意义外，其他各指标与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而DN组8周、12周的CRP、IL-6、IL-8又高于Irb组(P ＜0.01)。Irb组12周CRP与8周比较降低(P＜0.05);DN组12周CRP与8周比较降低但差异无统计学意义(P＞0.05)。Irb组12周IL-6与8周比较降低(P＜0.01);DN组12周IL-6与8周比较上升(P＜0.05)。Irb组和DN组12周IL-8高于8周(P ＜0.01);Irb组和DN组8周、12周的IL-10均低于C组，而DN组8周、12周的IL-10又低于Irb组(P＜0.01);Irb组12周的IL-10高于8周(P＜0.01);但DN组12周的IL-10低于8周(P＜0.01);C组12周与8周的上述各指标无明显变化。见表1。

表1 3组大鼠CRP、IL-6、IL-8、IL-10水平变化n=12，±s

表1 3组大鼠CRP、IL-6、IL-8、IL-10水平变化n=12，±s

注:与C组比较，*P ＜0.05;与DN组比较，#P ＜0.01;与8周比较，△P ＜0.05，☆P ＜0.01

组别 CRP(mg/L)IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)IL-10(ng/L)8周 12周8周 12周8周 12周8周 12周5.4±1.6 39.8±1.6 40.5±2.2 DN组 23.6±6.9* 21.5±3.6* 81.5±2.4* 84.0±3.5＊△ 26.5±2.3* 59.3±1.3＊☆ 21.3±2.5* 18.0±3.6＊☆Irb组 14.3±6.0*# 11.6±3.6*#△ 68.8±4.1*# 47.9±5.2*#☆ 16.1±2.1# 21.5±2.6*#☆ 25.6±3.5*# 33.2±3.0*#☆C组 6.4±2.3 6.0±3.2 18.7±3.6 19.6±1.2 13.9±1.9 1

3 讨论

目前，炎性反应在DN发病中的作用越来越受到人们的关注。许多实验和临床资料均提示糖尿病常存在炎细胞浸润和细胞因子、炎性介质水平上升，无论1型还是2型DN，早期肾组织中均有单核/巨噬细胞(ED-1)的浸润。糖尿病时肾组织局部肾素-血管紧张素系统(RAS)活性上升，血管紧张素Ⅱ不仅可以通过影响血流动力学致DN，还可通过刺激单核细胞释放炎性趋化因子(MCP-1)、细胞因子、黏附分子引起慢性炎症影响DN进展。随着对肾素血管紧张素系统作用的不断认识，人们发现血管紧张素Ⅱ在微炎性反应中可能起着十分重要的作用［1］。ARB类药物通过阻断肾素-血管紧张素系统而发挥肾脏保护作用。厄贝沙坦是继氯沙坦、缬沙坦后的又一新型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，可阻断RAS，存在降压以外的减少尿蛋白，保护肾脏的作用。本试验研究在STZ诱导下建立DN大鼠模型，通过检测实验性DN大鼠不同阶段炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-10、CRP的变化，从炎症/抗炎细胞因子方面探讨厄贝沙坦治疗DN可能的作用机制。

以往研究表明DN的发生发展与炎性细胞因子和抗炎细胞因子的失衡有关，炎性细胞因子分泌活跃，而抗炎细胞因子分泌相对减弱［2］。抗炎细胞因子产生的量不足以对抗促炎因子的作用，最终导致DN的发生。DN患者体内存在炎性反应，而炎性反应也是DN持续进展的因素［3］。本研究结果显示DN组12周IL-6、IL-8的分泌水平明显高于8周，经过厄贝沙坦干预后，厄贝沙坦干预组大鼠血清炎症细胞因子IL-6、IL-8和CRP含量与DN组相比明显降低，随着厄贝沙坦干预时间的延长12周IL-6、IL-8和CRP的分泌水平明显低于8周，呈减少趋势，而抗炎细胞因子IL-10分泌水平反而增加，说明厄贝沙坦作为血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，有可能通过与AT1受体结合，阻断血管紧张素Ⅱ的致炎作用，致使部分炎性细胞因子IL-6、IL-8和CRP产生和释放减少，而刺激抗炎细胞因子IL-10的表达增加，部分逆转炎症细胞因子和抗炎细胞因子的失衡，在一定程度上抑制机体炎性反应。ARB类药物从受体水平阻滞了血管紧张素Ⅱ的作用，理论上能更有效、更特异地阻断RAS系统，起到抗炎作用。ARB类药物可阻滞C-C趋化因子2b型受体，干扰其在炎症部位对单核细胞的趋化作用，从而直接调节机体的免疫系统，阻断RAS系统起到抗炎作用［4］，使单核细胞活化和转化受到抑制，肾组织单核细胞浸润减少，内皮细胞功能得到改善，MC增殖减缓，细胞外基质成分在肾脏局部的积聚减轻，对肾脏病变起到保护作用。

总之，厄贝沙坦能延缓糖尿病大鼠肾脏功能损害的进展，其机制可能与厄贝沙坦不同程度地抑制DN大鼠IL-6、IL-8和CRP的产生，刺激IL-10的分泌有关，通过阻断血管紧张素Ⅱ的致炎作用，部分逆转炎症细胞因子和抗炎细胞因子的失衡，降低蛋白尿、抑制肾小球硬化，而延缓DN的进展。本研究从炎症/抗炎细胞因子方面探讨厄贝沙坦治疗DN可能的作用机制，为深入研究DN发病机制及其治疗提供新的思路。

1 李敏侠.血管紧张素Ⅱ和微炎症反应.国际泌尿系统杂志，2006，26:139-143.

2 郄会卿，董焕娥，吴亚，等.糖尿病肾病大鼠炎症细胞因子的变化.河北医药，2010，32:2729-2730.

3 杨世峰.C反应蛋白与糖尿病肾病的研究进展.医学综述，2008，14:432-434.

4 Marshall TG，Lee RE，Marshall FE.Common angiotension receptor blockers may directly modulate the immune system via VDR，PPAR and CCR2b.Theor Biol Med Model，2006，3

:1-33.

Influence of irbesartan intervention on inflammatory cytokines in rats with diabetic nephropathy

QIE Huiqing* ，DONG Huan’e，LIU Cuiqing*，et al．*Traditional Chinese Medical Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050011，China

ObjectiveTo observe the effect of irbesartan intervention on the levels of inflammatory cytokines including interleukin-6(IL-6)，interleukin-8(IL-8)，interleukin-10(IL-10)and C-reactive protein(CRP)in rats with diabetic nephropathy(DN)，and to investigate the possible drug action mechanism.Methods

36 Wistar rats were randomly divided into three groups:control group(right nephrectomized)，diabetic nephropathy group(DN group)and irbesartan treatment group，and there were 12 rats in each group.At the end of the 8th and the 12th week，the serums of the rats were collected.The levels of IL-6，IL-8，IL-10 and C-reactive protein in serum were detected by ELASA.ResultsAt the end of the 8th and the 12th week，the levels of IL-6，IL-8 and CRP in irbesartan treatment group and DN group were significantly higher than those in control group，and the levels of IL-6，IL-8 and CRP in DN group were significantly higher than those in irbesartan treatment group(P＜0.01).At the end of the 8th and the 12th week，the levels of IL-10 in irbesartan treatment group and DN group were significantly lower than those in control group，and the levels of IL-10 in diabetic nephropathy group were significantly lower than those in irbesartan treatment group(P＜0.01).ConclusionIrbesartan can inhibit the production of IL-6，IL-8 and CRP and can stimulate the secretion of IL-10，as a result，which can improve partly the unbalance of inflammatory cytokines and anti-inflammatory cytokines，decrease and inhibit glomerular sclerosis，thereby，which can delay the advancement of diabetic nephropathy.

interleukin-6;interleukin-8;interleukin-10;C-reactive protein

R 587.24

A

1002-7386(2011)09-1305-02

10．3969/j．issn．1002-7386．2011．09．008

项目来源:河北省医学科学研究重点课题(编号:20090304)

050011 石家庄市，河北省中医院(郄会卿、刘翠清、王春秀);河北省石家庄市中心医院(董焕娥)

2011-01-14)

·论著·