金丝桃苷对四氯化碳诱导肝细胞损伤的保护作用
2011-03-06
(中国人民解放军第三军医大学西南医院药学部,重庆 400038)
肝脏损伤是指由多种有害因子和物质引起的肝脏病理和生理异常,每年因肝病死亡的人数约为30万人,但目前尚无可有效减轻肝脏损伤和促进肝细胞再生的药物。金丝桃苷(hyperin,HP)广泛存在于藤黄科、杜鹃花科、豆科及卫矛科等多种植物的黄酮醇苷化合物中,已在20多种植物中被发现。药理研究表明,金丝桃苷具有较好的镇痛、免疫调节等作用,以及较强的抗氧化作用,本研究旨在探讨金丝桃苷对四氧化碳(CCl4)诱导化学性肝细胞损伤的保护作用及其机制,现报道如下。
1 仪器与试药
722s型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);450型酶标仪(美国Bio-Rad公司)。金丝桃苷(中国药品生物制品检定所,批号为111521-200303);CCl4购于Sigma公司;天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号分别为20070312,20070402,20071029,20071010);噻唑蓝(Amresco 公司,北京拜尔迪生物公司分装);二甲基亚砜(DMSO,天津化学试剂有限公司)。
2 方法与结果
2.1 诱导肝细胞损伤所需CCl4适宜浓度的确定
取对数生长期L-02人肝细胞,消化后用RPMI-1640培养液调整细胞密度为5×104/mL,肝细胞活力大于90%。加入96孔培养板中,每孔100 μL细胞悬液,于37℃及5%CO2培养箱中培养24 h,肝细胞全部贴壁生长后待用。以CCl4原液4.82 mL溶于DMSO 5.18 mL,制成5 mol/L的CCl4液,以含 10%胎牛血清的 RPMI-1640 液稀释配成含 2.5,5.0,10.0,15.0,20.0,30.0 mmol/L CCl4的溶液。加入96孔培养板,以无CCl4的RPMI-1640培养基为空白对照。每个浓度做5个平行孔,培养24 h后,以四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色(MTT)法测肝细胞存活率。……
