宋祥福，孙冰雪，张静春，龚守良

（1.吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室，长春 130021；2.吉林大学生命科学院药物制剂，长春 130021；3.吉林大学中日联谊医院检验科，长春 130033）

腹部接受一定剂量射线照射后，小肠因其黏膜上皮生长代谢活跃，对电离辐射最为敏感，而成为受损伤的主要器官。放射性肠损伤疾病在治疗中存在着很大的困难，目前多以对症治疗为主。MSCs具有强大的增殖能力和多向分化潜能，免疫原性弱，易从骨髓中分离、纯化及体外扩增等特点，因此是异体组织修复的理想的种子细胞。创伤可以刺激MSCs迁移至受损器官或组织，并有助于受损组织修复和重建［1］。为此，本研究拟通过体外培养扩增大鼠MSCs后注入放射性空肠损伤模型大鼠，观察其移植后对空肠组织修复情况，为其临床应用奠定基础。

1 材料和方法

1.1 试剂与仪器

DMEM培养基（Gibco公司）、胎牛 血清（Hyclone公司）、胰蛋白酶（Gibco公司）和4，6-2-苯基吲哚（4，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）（Sigma公司）。倒置显微镜（日本Olympus）、冰冻切片机（德国莱卡）、激光共聚焦显微镜（日本Olympus）。

1.2 MSCs分离、纯化与体外培养与标记

选用5d大鼠乳鼠（8.0～10.0g），颈椎脱臼法处死，75％酒精浸泡5min，无菌条件下快速分离股骨和肱骨，剪除骨两端，用5.0mL L-DMEM培养基，反复冲洗骨髓腔内骨髓于培养皿内，经反复吹打制成单细胞悬液，加入L-DMEM培养液（含15％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素）以1.0×105/mL接种于50mL培养瓶中，37℃5％CO2饱和湿度孵箱培养，3d后第一次半量换液，以后换液依具体情况而定，细胞接近90％融合时，按1.5×104/mL传代。倒置显微镜逐日观察，直至贴壁细胞融合铺满瓶底，重复以上操作，反复传代扩增。……