王 吉，卫 礼，岳秉飞，贺争鸣

（中国药品生物制品检定所、国家实验动物质量检测中心，北京 100050）

呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo3）属呼肠孤病毒科的正呼肠孤病毒属。此种病毒可感染所有哺乳动物，包括小鼠、地鼠、豚鼠、猫和犬等［1-2］。并且能在人、猴、豚鼠、地鼠、猫、狗、猪和牛的原代肾细胞以及Hela、KB、FL和L细胞等传代细胞中增殖并引起细胞病变。Reo3也能感染人，能引起儿童腹泻、呼吸道感染及脑膜炎等疾病［2-4］。由于上述动物和细胞存在Reo3的自然感染，而用上述动物原材料或细胞而生产的人用生物制品也可能存在Reo3的潜在污染，对人用动物原材料及动物源性生物制品的使用安全性造成潜在威胁［5］。

因此建立Reo3免疫荧光（IFA）检测方法，开展对人用动物原材料及动物源性生物制品外源Reo3的检测，保证生物原材料及制品的使用安全性至关重要。本文旨在建立简单、快速、特异、敏感的免疫荧光检测方法，对人用动物源性生物材料及其制品进行Reo3检测。

1 材料和方法

1.1 主要材料

Reo3毒种、BSC-1细胞、BHK21细胞：本室冻存；免疫荧光素（山羊抗小鼠IgG-FITC）：KPL公司产品；SPF BALB/c小鼠，中国药品生物制品检定所实验动物资源中心生产（许可证号：SCXK（京）2009-0017）；小鼠抗Reo3血清及小鼠阴性血清：本室制备；乙型脑炎减毒活疫苗：本所疫苗一室提供。

1.2 主要仪器

荧光显微镜：Olympus IX；37℃水浴箱：上海森信实验仪器有限公司DK-4500B型；37℃培养箱：WGP-600；多孔荧光片：Thermo公司产品。

1.3 方法

1.3.1 敏感细胞的筛选和病毒感染力滴度（TCID50）测定：选择BHK21细胞和BSC-1细胞分别接种Reo3毒种，每天观察细胞病变（CPE）。待细胞50％～80％发生圆缩病变后，收冻。……