李晓云，路义鑫，韩彩霞，朱江巍，宋铭忻

（东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨150030）

旋毛虫病（Trichinellosis）是一种重要的人兽共患寄生虫病，主要因生食或半生食含旋毛虫幼虫的肉类所致。该病的流行不但对畜牧业、食品业及外贸出口造成了重大经济损失，而且对人类健康构成威胁［1－2］，因而及时准确地诊断并治疗旋毛虫病显得至关重要。ELISA作为一种快速的诊断方法具有方便、快捷、成本低的优点，成为目前国内外在疾病诊断方面最重要的方法之一，特别是在血清诊断、大规模普查以及海关的进出口检疫方面。旋毛虫感染过程中排泄－分泌（excretory－secretory，ES）抗原直接暴露于宿主的免疫系统，是诱导宿主产生免疫反应的主要靶抗原，在旋毛虫病的免疫病理、免疫诊断及免疫预防方面具有重要作用。ES抗原中，主要的特异性蛋白成分有3种，分子量分别为45、49ku和53ku，占 ES总量的50%以上［3－4］。本试验利用原核表达获得的旋毛虫49ku ES重组抗原，初步建立了检测血清中抗旋毛虫排泄分泌蛋白P49抗体的间接ELISA方法，旨在为旋毛虫新型ELISA抗体诊断试剂盒的研制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验用材料

1.1.1 重组抗原 纯化的本地毛形线虫（T.nativa）P49重组蛋白，表达该蛋白的菌种由本实验室保存。

1.1.2 血清T.nativa标准阳性和阴性血清制备方法如下：以T.nativa肌幼虫200条感染健康昆明系小鼠，30d后眼球采血，分离血清即为旋毛虫阳性血清，采取健康昆明系小鼠血清即为阴性血清。

1.1.3 其他材料 96孔ELISA可拆酶标板，购自加拿大JET公司；羊抗鼠IgG－HRP和四甲基联苯胺二酸盐（TMB），购自Sigma公司；……