荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒研究
2011-02-10徐静张英波朴素萍
徐静 张英波 朴素萍
乙型肝炎病毒DNA定量检测对乙型肝炎的诊断、抗病毒疗效观察及预后判断均具有重要意义。随着荧光定量PCR技术的发展,由于其灵敏、快速、极低的假阴、假阳性率,该技术在临床上已被广泛用于检测HBV-DNA,而酶联免疫吸附试验法检测血清中HBV免疫标志物仍旧是诊断乙型肝炎的常用方法。本文对荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒进行了研究。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2009年12月至2010年12月我院传染科住院及门诊疑似乙肝患者共计268例。
1.2 方法 本实验应用美国产ABI7300实时荧光定量扩增仪。FQ-PCR试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。严格按照仪器操作规程及实验步骤操作,电脑自动分析计算出定量结果。
1.3 统计学方法 采用χ2检验,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
用FQ-PCR法测定了268例标本,结果发现130例HBVDNA阳性。应用ELISA重新测定这130例HBV-DNA阳性标本的 HBV 血清标志物 HBsAg、HBsAb、PreS1、HBeAg、HBe-Ab和HBcAb。在130例HBV-DNA阳性标本中,对PreS1和HBeAg而言,HBeAg单独阳性31例(23.8%);PreS1单独阳性26例(20.0%)PreS1和HBeAg同时阳性54例(41.5%);HBeAg总阳性率为65.3%;PreS1总阳性率为61.5%;PreS1和HBeAg联合检出率(单HBeAg阳性,单PreS1阳性及二者同时阳性例数之和同总例数之比)为84.6%;HBcAb阳性率为94.0%。
同时,应用ELISA检测了95例HBV-DNA阴性但HBsAg阳性标本中HBV血清标志物。在95例HBV-DNA阴性但HBsAg阳性标本中,对PreS1和HBeAg而言,HBeAg单独阳性2例(2.1%);PreS1单独阳性18例(18.9%);二者同时阳性2例(2.1%);HBeAg总阳性率为4.2%;PreS1总阳性率为21.0%;HBcAb阳性率90例,阳性率为94.7%。
PreS1及HBeAg在HBV-DNA阳性标本阳性率分别显著高于HBV-DNA阴性但 HBsAg阳性标本(61.5%vs 21.0%,65.3%vs 4.2%,P<0.01),显示二者同HBV-DNA复制关系密切,可作为HBV复制的指标;在HBV-DNA阴性但HBsAg阳性标本共95例中,PreS1阳性率为21.0%(20/95),HBeAg阳性率为……
