邱建波，徐 清，姜笑寒

广东省食品药品职业技术学校，广东广州 510663

独活为伞形科植物重齿毛当归（Angelica pubescens Maxim.f.biserrata Shan et Yuan）的干燥根，其主要功能是祛风除湿，通痹止痛。用于风寒湿痹，腰膝疼痛，少阴伏风头痛，风寒挟湿头痛[1]。独活的化学成分主要有香豆素类和挥发油类[2-4]，以香豆素类为主，治疗风湿多泡酒饮用。本研究拟通过独活的乙醇提取物在体外对环氧化酶（包括COX-1和COX-2）活性的影响来探讨其祛风湿的可能作用机制，为独活的临床应用和组方选药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

动物：SD雄性大鼠，体重180～220 g，购自中山大学实验动物中心。

药物：称取粉碎的药材，加入适量95%乙醇室温浸泡过夜，用索氏提取器提取1 h，减压蒸干溶剂，用二甲基亚砜（DMSO）溶解残留物，15 000 r/min离心 10 min，取上清，定容使其终浓度为1 g/ml（每毫升含1 g生药），热压灭菌后，-20℃保存备用，实验前用DMSO稀释成相应浓度。

试剂：RPMI 1640干粉购自Gibco公司；花生四烯酸（AA）购自 Cayman 公司；脂多糖（LPS）购自 Sigma公司；胎牛血清（FCS）购自杭州四季青公司；塞来昔布（Celecoxib），辉瑞公司惠赠；吲哚美辛，为标准品，购自中国药品与生物制品检定所；PGE2和6-keto-PGF1α放免试剂盒购自解放军总医院东亚放免研究所；其他试剂为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 COX-1和COX-2模型的建立 参照文献[5]方法制备大鼠腹腔巨噬细胞COX-1和COX-2模型。大鼠腹腔注射0.4%明胶4～5 ml，4 h后，击头处死大鼠。用冷Hanks液灌洗腹腔，每只10 ml，收集灌洗液，灌洗 3次，1 500 r/min离心5 min，RPMI-1640洗涤2次。调整细胞数为106个/ml，接种至96孔培养板，每孔0.2 ml。在37℃，5%CO2培养箱培养2 h，洗去未贴壁细胞，继续培养24 h后，换0.5%FCS的RPMI-1640培养基培养24 h，作为COX-1模型。在此基础上，再以10%FCS的RPMI-1640培养30 min，加入阿司匹林（终浓度1 mmol/L），继续培养30 min后，弃上清，PBS冲洗。……