蒋海鹰 颜亚晖 罗庚求 周 庆

（中南大学基础医学院病理学系 湖南长沙410013）

细胞体外侵袭实验主要应用于肿瘤细胞侵袭和转移能力研究。该实验经常使用Transwell plate通过matrigel穿膜侵袭实验来检测肿瘤细胞的侵袭潜能。但在具体实验中获得真实、最佳实验结果图象并借以说明问题并非简单。甚至在实验结果染色时按常规处理，操作复杂，处理不当，易致样本混淆，实验失败［1］。本文采用新鲜配制苏木素染液，利用培养板直接对Transwell plate进行染色，并置于培养板中在倒置显微镜下直接观察，可获满意结果。

材料和方法

1.材 料

Transwell plate，六孔培养板，新鲜配制的苏木素染液，眼科弯镊一把，10%甘油明胶等。

2.方 法

2.1 用镊子小心取出Transwell plate上室，置于标记编号的六孔板相应孔中。用滴管将Transwell上室和孔同时注入PBS，浸泡洗涤2次。

2.2 用PBS湿润的棉签，轻轻擦去上室内的matrigel凝胶和聚碳酸膜上面的细胞，并用PBS侵泡洗涤。

2.3 以95%乙醇侵泡固定Transwell上室穿膜细胞20min，再用PBS洗涤2次。

2.4 以新鲜配制的苏木素染液，侵染3－5min，用自来水浸泡洗涤，自然返蓝。

2.5 伊红浅染，快速洗涤。

2.6 另取洁净六孔板，孔中滴入10%甘油明胶，取已染色好的Transwell上室置于甘油明胶中，即可在倒置显微镜下观察结果。

结 果

穿膜的细胞染色清晰，核浆颜色分明，背景干净，便于计数，见图1，2。

讨 论

1.细 胞的洗涤

在染色过程中，每一步均需洗涤，更换六孔板孔中的PBS或蒸馏水，同时并用滴管将Transwell上室也注满，浸泡洗涤，以降低染色背景，使细胞着色清晰。

2.凝 胶和聚碳酸膜上的细胞擦拭

擦拭凝胶和膜上的细胞时须注意棉签湿润即可，不能滴水；……