黑常春 马宁芳 王燕蓉＊

（1宁夏医科大学生育力保持省部共建教育部重点实验室，宁夏生殖与遗传重点实验室；2宁夏医科大学人体解剖与组织胚胎学系 银川750004；3广州医学院组胚教研室 广东510182）

正常状态下，体内的Th1／Th2处于动态平衡，调节机体正常的免疫应答，一旦Th1／Th2比例失衡，就可能会发生免疫功能紊乱。因此以恢复Th1／Th2细胞平衡为目标的治疗策略是治疗某些慢性炎症性疾病和自身免疫性疾病的一种新方法［1，2］。通过最新的FlowCytomix技术，检测肝、脾、血清中Th1／Th2类细胞因子的含量，观察ConA诱导的急性免疫性肝损伤过程中Th1／Th2类细胞因子的变化，探讨急性免疫性肝损伤的机制以及脾脏对急性免疫性肝损伤的影响作用，为今后急性免疫性肝损伤的临床治疗提供新的思路和理论支撑。

材料和方法

1材 料

1.1 动物：清洁级健康雄性Balb／c小白鼠32只，体重18-22g，6-8周龄，由广州中山医科大学动物中心提供（SCXK粤2004-0011），实验前适应性饲养3天。

1.2 试剂

（1）小鼠 Th1／Th2 10plex（IL-1，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-10，IL-17，IFN-γ，TNF-α，GM-CSF）检测试剂盒，96Tests，编号BMS820FF，购自美国Bender公司。

（2）RIPA组织裂解液，购自上海申能博彩生物科技有限公司。

1.3 仪器设备

（1）多功能细胞分析系统（流式细胞仪），美国贝克曼库尔特有限公司产品，型号Cell Lab Quanta SC

（2）台式高速低温离心机，德国SIGMA公司，型号：3K15

（3）电子天平，上海精科公司，型号：FA1004

2方 法

2.1 动物分组及模型的制备

随机分为2组：

正常对照组（n＝8只），尾静脉注射等量生理盐水。

肝损伤组（n＝24只），尾静脉注射刀豆素蛋白A（ConA）12.5mg／Kg一次。

2.2 取材及肝脾组织裂解液提取方法：肝损伤组分别于ConA注射后8、24、72小时后各组随机取8只鼠，正常对照组同肝损伤组72h一同取材，摘眼球取血，取血后断颈处死，称取新鲜肝、脾组织各1 00mg，分别装入标记好的1.5ml EP管中，-80℃备用。……