高 照，张亦农

（国家体育总局中国反兴奋剂中心，北京 100029）

抗凝血药物是国际马术联合会（International Equestrian Federation，FEI）禁用药物名录中的一类药物[1]，由于香豆素类及茚酮类抗凝血药物具有生物活性且广泛存在于天然产物中，近年来有关该类物质的临床应用和毒性引起了人们的普遍关注。欧洲食品安全局在对动物肝中毒实验的非显著性不良效应水平研究基础上，规定了人每日可承受的最大摄入量为0.07 mg/kg[2]。目前针对该类药物主要采用液相色谱法进行药物毒理和体内代谢方面的研究，对几种药物，尤其是双香豆素和苯茚二酮类的液相色谱－质谱（LC－MS/MS）测定方法的研究较少[3－4]。HPLC－MS/MS法灵敏度高、专属性和特异性好，是近年来兴奋剂检测方法主要的发展方向[5]。本实验通过固相萃取净化等手段纯化和富集样品，运用HPLC－MS/MS进行快速分析和筛查，并对该类化合物的电喷雾离子化裂解途径进行归纳，建立能够同时快速筛查和定量测定饲料中该类药物的方法。

1 试验部分

1.1 主要仪器与装置

Agilent 6410LC－MS/MS系统（1200binary快速液相，6410/2k－A三重四极杆质谱仪）：美国Agilent公司产品；高速冷冻离心机：美国Sigma公司产品；涡旋振荡器：Scientific Industry公司产品；固相萃取装置：美国 Waters公司产品；Milli－Q纯水系统：美国Millipore公司产品。

双香豆素（dicoumarin）和雌三醇（IS）：购自中国药品生物制品检定所；醋硝香豆素（acenocoumarin）、苯茚二酮（phenidione）、苄丙酮香豆素（warfarin）、香豆素（coumarin）：均购自上海安谱科学仪器有限公司。双香豆素使用氯仿溶解，其他标准品使用甲醇溶解，各配制1g/L标准储备液，分别用甲醇稀释标准储备液制备系列标准工作液。……