赵 暘 杨向红* 罗秀波 徐 刚

（1 中国医科大学附属盛京医院病理科，辽宁 沈阳 110004；2 中国人民解放军第463医院病理科，辽宁 沈阳 110042）

国际癌症研究中心于2004年提出HPV感染是宫颈鳞癌和上皮内瘤变发生的必要因素；没有持续HPV感染，女性发生宫颈鳞癌的可能性几乎为零[1,2]。p16基因是一种细胞周期中的基本基因，直接参予细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，在人类50%肿瘤细胞株中发现有p16的纯合子缺失，突变，认为p16是比p53更重要的一种新型抗癌基因[3]。宫颈癌发生过程中p16的表达与HPV的感染是否相关，以往研究存在争议，有待于进一步研究。本研究探讨临床患者HPV感染、p16蛋白表达与慢性宫颈炎、癌前病变及宫颈癌的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

取自2009年3月至2010年3月盛京医院妇产科门诊活检和住院手术切除的宫颈标本石蜡包埋组织130例，其中慢性宫颈炎25例，CINⅠ20例，CINⅡ27，CINⅢ31例，浸润癌27例（鳞状细胞癌），患者年龄21～65岁，平均40岁。

1.2 主要实验仪器及实验试剂

凯普HPV核酸扩增分型检测试剂盒、即用型鼠抗人p16单克隆抗体及二步法PV-9000试剂盒购自北京中杉金桥技术有限公司。

1.3 方法

所有患者在取组织标本前，取宫颈脱落细胞和分泌物，接受HPV检测。采用HybriMax通过样本DNA的提取、PCR扩增、导流杂交、酶标显色，均严格按照试剂盒说明书进行操作，肉眼观察判读结果。

免疫组织化学染色：用乳腺癌作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照，严格按试剂盒的说明书进行操作。结果判定：p16阳性表达定位在细胞核和细胞质，胞核或胞质出现棕黄色为染色阳性细胞。……