马娟 陈吉丽

早发冠心病与载脂蛋白B、载脂蛋白E基因多态性的关系

马娟 陈吉丽

目的 探讨载脂蛋白B（ApoB）、E（ApoE）基因多态性与早发冠心病的相关性。方法 采用基因芯片技术分析24例早发冠心病和66例迟发冠心病的ApoB XbaI、ApoE112/158基因多态性及等位基因频率分布，入选病例均行冠状动脉造影确诊。结果 早发冠心病组ApoB XbaI;ApoE112/158基因型分布与晚发冠心病组相比无明显差异(P＝0.757；P＝0.579)。两组的ApoB XbaI的等位基因频率分布无明显差异（P＝0.757），而早发冠心病组的ApoE112/158的等位基因ε4频率高于晚发冠心病组(P＜0.05)。结论 ApoB XbaI多态性可能不是中国人早发冠心病的危险因素，而ApoE112/158的等位基因ε4可能是一个潜在危险因素。

早发冠心病；载脂蛋白B；载脂蛋白E；基因多态性

冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease，CHD)是由遗传和环境危险因素共同作用而发病的多基因遗传性疾病。在CHD的发生和发展中，遗传因素可能更为重要。早发CHD是指冠心病发生时男性≤55岁，女性≤65岁[1]，是冠心病的一种特殊形式。近年来随着分子生物学的迅速发展及人类基因组计划的进行，从基因水平阐明CHD尤其是早发CHD发病机制成为医学研究的热点[2]，但各地报道不一，未见基因芯片技术联合分析载脂蛋白B(ApoB)、ApoE基因多态性与早发CHD相关性的报道，本研究应用基因芯片技术联合检测ApoB、ApoE基因多态性及等位基因频率，分析它们与早发CHD的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象

昆明市第一人民医院心内科收住的CHD患者90例，符合关于缺血性心脏病（IHD）的命名和诊断标准，均为冠状动脉造影证实冠状动脉病变患者，男63例，女27例。以男≤55岁及女≤65岁患冠心病为早发冠心病，男＞55岁及女＞65岁患冠心病为迟发冠心病。以24例早发冠心病为病例组，平均年龄(49.6±6.2)岁，男20例，女4例，以66例迟发冠心病为对照组，平均年龄(69.2±7.8)岁，男43例，女23例。研究人群之间无血缘关系。

1.2 方法

采用基因芯片检测技术，结合PCR体外扩增方法，检测人类冠心病相关基因ApoB XbaI、ApoE112/158的多态性情况。

1.2.1 标本采集 采集被检者静脉血0.5mL，用一次性无菌注射针头抽取，收集于含50μL的2%EDTA溶液的无菌1.5mL离心管中，盖上管盖，上下颠倒数次使混匀。

1.2.2 存放 上述血样在2～8℃保存，保存期不应超过3周；在-20℃保存期半年，-80℃可长期保存，但严禁反复冻融。

1.2.3 扩增 采用适用0.2mL扩增管并有热盖的PCR扩增仪。

1.2.4 杂交 在芯片杂交过程中采用温控精度为±0.5℃的恒温设备（BaiO FLWS-526全自动杂交仪）进行杂交。

1.2.5 结果收集 在芯片杂交信号检测时采用BaiO BE-2.0生物芯片识读仪。图像Array Docctor软件分析可自动输出检测结果，最后检测出ApoB XbaI、ApoE112/158基因的多态性位点。

1.3 质量控制

在每次检测中都应设置阴性、阳性、对照品。产品检测过程中，若软件对“标志列、阴性、阳性对照”三者进行判断后，输出其中之一为“不合格”，则实验无效。

1.4 结果判断（由软件自动判断并输出结果）

当软件判断标志列、阴性、阳性对照均合格时，会自动输出检测结果。见表1。

表1 检测结果判断

1.5 统计学分析

应用SPSS11.5软件包作统计学处理。计量资料比较用t检验；ApoB XbaI、ApoE112/158基因型和等位基因频率之间的比较用x2检验，同时计算优势比(OR)及95%可信区间（95%CI），P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对入选患者进行一般临床资料分析

入选患者的一般临床资料在早发CHD组及晚发CHD组之间除年龄比较差异有统计学意义以外，总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、左心室舒张末径、左心室收缩末径、左心室射血分数差异均无统计学意义。见表2。

表2 两组一般临床资料比较

2.2 ApoB XbaI基因型和等位基因检测结果

早发CHD组及晚发CHD组ApoB XbaI基因型均以X-X-型最常见，X+X-型次之，早发CHD组及晚发CHD组均无X+X+基因型出现，两组基因型分布相比差异无统计学意义（P＝0.751），早发CHD组等位基因X+频率稍高于晚发CHD组，但两组比较差异无统计学意义（95.8%：94.7%，P＝0.757）。提示ApoB基因多态性与冠心病的早发可能无相关性。见表3。

表3 ApoB XbaI基因型分布及等位基因频率（%）

2.3 ApoE112/158基因型和等位基因检测结果

两组ApoE112/158基因型均以ε3/3型最常见，ε2/3型次之；未见ε2/2基因型出现；两组基因型分布相比差异无统计学意义（P＝0.579）；早发CHD组ApoE112/158等位基因频率：ε3＞ε4＞ε2；晚发CHD组ε3＞ε2＞ε4；早发CHD组ε4等位基因频率明显高于晚发CHD组（16.7%：9.5%；P＜0.05，OR＝2.301，95%CI＝1.203～4.398），提示ApoE112/158基因多态性与早发CHD发病存在密切关联，ε4等位基因可能是CHD早发的潜在危险因素。见表4。

表4 ApoE112/158基因型分布及等位基因频率分布（%）

在两组患者中未发现ApoE-ε4/4，ApoB-X+X+基因型联合出现。

3 讨论

载脂蛋白是脂代谢的主要载体。ApoE和ApoB在脂质代谢中特别是致动脉粥样硬化的脂代谢中起重要作用[3]。ApoE的ε4 的等位基因频率分布可能与世界各地冠心病发病率不同有密切关系。ApoB基因XbaI多态性与冠心病、动脉硬化、心肌梗死的关系比较密切。

3.1 ApoB与早发冠心病的关系

尽管支持ApoB基因变异与冠心病有关的研究较多，但ApoB基因多态性与冠心病的关系仍存在争论。Turner[4]在欧洲做了一个研究，682名学生来自于14所大学，他们的父辈均有早发冠心病史；对照组有1312名学生，也来自于同一人群。他做了ApoB基因的Xba／、信号肽插入／缺失和3’端串联重复序列多态性的分析，发现两组间各种等位基因频率无明显差异；但是XbM和3’端串联重复序列多态性有明显的地区差别，脂蛋白浓度与不同的基因型有关。他认为不同的基因型虽然与血脂有关，但是并不能预测心血管疾病。国内外多数研究认为ApoB和ApoB基因以某种机制参与动脉粥样硬化的形成，进而导致心脑血管病，但亦有反对意见，认为需要排除种族差异性、生活习惯及环境因素的影响等，才能进一步证实ApoB、ApoB基因与动脉粥样硬化的关系和机制。本研究显示早发冠心病组与晚发冠心病组ApoB的基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义，不支持ApoB基因变异与冠心病有关。

3.2 ApoE与早发冠心病的关系

Kolovou等[5]曾推测如果ApoE基因多态性在动脉粥样硬化的发病机制中是一个重要的遗传因素，它将影响CHD的发病年龄。一项对瑞典双生子的研究中指出，年轻患者发生CHD主要是受遗传因素影响，而到了老年，引起CHD的发生可能由环境因素占主要成分。Keavney等[6]研究提示ε4基因型不仅是CHD发病的独立危险因子，而且是早发CHD的独立危险因子，纯合子ε4／4更是导致CHD发病年龄提前的危险因素。说明ApoE可能参与了动脉粥样硬化的遗传过程，使CHD的发病年龄有提前的趋势。本研究中早发CHD组ε4等位基因频率明显高于对照组（16.7%：9.5%；P＜0.05，OR＝2.301，95%CI＝1.203～4.398），提示ApoE112/158基因多态性与早发CHD发病存在密切关联，ε4等位基因与CHD早发相关，与以上结论一致。

近年来有关载脂蛋白和它们的基因多态性与冠心病的关系的研究，虽然取得了一些进展，但是因为影响血脂代谢及冠心病的候选基因很多，载脂蛋白基因多态性是通过引起血脂代谢异常导致冠心病发生或发展，还是作为独立的冠心病易患因素在遗传水平上起作用，或是与其他基因协同起作用尚未完全明了，所以有关载脂蛋白基因多态性与冠心病相关关系的研究有待更大样本的获取以及更加周密的科研设计。

[1] 中华心血管病杂志编委会血脂异常防治对策组.血脂异常防治建议[J].中华心血管病杂志，1997，25（3）：169-172.

[2] 肖刚生.绝经后冠心病女性的性激素水平及血脂水平调查[J].当代医学，2009，15(22)：65-66.

[3] Hauser ER, Mooser V,Crossman DC，et a1.Design of the genetics of early onset cardiovascular disease(GENECARD)study[J].Am Heart J，2003，145(4)：602-613.

[4] Lundstam U，Herlitz J，Karlsson T，et a1.Serum lipids，lipoprotein(α) level，and apolipoprotein(α)isoforms as prognostic markers in patients with coronary heart dlsease.J Intern Med，2002，251（2）：111-118.

[5] Kolovou GD，Anagnostopoulou KK.Apolipoprotein E polymorphism，age and coronary heart disease[J].Ageing Res Rev，2007，6(2)：94-108.

[6] Keavney B，Parish S，Palmer A，et a1.Large-scale evidence that the cardiotoxicity of smoking is not ignificantly modified by the apolipoprotein E2／E3／E4 genotype[J].Lancet，2003，361(9355)：396-398.

Objective To assess the association of apolipoprotein B(ApoB), E(ApoE) gene polymorphism with premature coronary heart disease. Methods Twenty-four premature CHD patients diagnosed by CAG at/ before aged 55 for males and 65 for females were assigned to premature CHD case group with other 66 CHD patients as the control group.Gene chip technology was performed to analyze ApoB Xbal,ApoE 112/158 gene polymorphism. The allele frequency and gene type distribution were compared between two groups. Results There was no obviously difference in the distribution of Apo B,ApoE genetype between two groups (P=0.757;P=0.579) .The frequency of X+ allele of ApoB was no signif cantly in patients with premature CHD than control group (P=0.757);the frequency of ε4 allele of Apo E112/158 was higher in patients with premature CHD than control group(P＜0.05).Conclusion The Apo B XbaI gene polymorphism may not be the risk factors of premature CHD in the Chinese;while the allele gene ε4 of ApoE112/158 may be a potential dangerous factor.

Premature coronary heart disease; Apolipoprotein B.E; Gene; Polymorphism

10.3969/j.issn.1009-4393.2011.19.015

昆明市卫生局资助项目（wsj0602）

650011 昆明市第一人民医院心内科（马娟 陈吉丽）