任燕冬 宋宏杉 陈巧云 张 宁▲

（1.黑龙江中医药大学佳木斯学院，黑龙江佳木斯 154007；2.大庆油田总医院集团龙南医院，黑龙江大庆 163453）

人体皮肤颜色各不相同，与种族、年龄、性别、外界环境以及某些疾病等因素密切相关，其中黑素细胞产生的黑素是决定皮肤颜色的主要因素[1]，酪氨酸酶是黑素生物合成途径中的主要限速酶，该酶活性大小决定着黑素形成的数量。杏仁含有丰富的脂肪油，具有使皮肤白嫩柔细、促进皮肤光洁红润的作用，是古今公认的美容佳品。本实验利用超临界CO2技术萃取杏仁油，主要研究杏仁油对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖及黑素合成的影响。

1 材料与方法

1.1 仪器

BCM-10004型超净工作台（苏净集团安泰公司制造）；OLYMPUS IX71倒置显微镜；HF-90 CO2培养箱；8-5K台式低速离心机（上海安亭科学仪器厂）；MK3型酶标仪（热电上海仪器有限公司）。

1.2 试剂

MEM培养基购于Gibco公司；胰蛋白、MTT购于Billab公司；PBS购于北京中杉金桥有限公司；L-dopa、TritonX-100、DMSO购于Sigma公司；小鼠黑色素瘤细胞B16购于中科院上海细胞所。

1.3 方法

1.3.1 杏仁油的提取 利用超临界CO2技术从杏仁中萃取杏仁油，备用。

1.3.2 细胞培养[2]选择对数生长期的同一代细胞，经0.25%胰蛋白酶消化，用含有10%小牛血清的RPMI 1640培养液传代，置于CO2培养箱37℃、5% CO2饱和湿度环境中进行培养。每一次实验取自同一传代细胞，初始接种细胞浓度为5000个/cm2左右。细胞接种24h后，弃上清液，添加待测药物。在37℃、5% CO2饱和湿度条件下培养，每一浓度设6个复孔，对照组不加药物代之同量维持液，培养3d，1.5d后更换药液1次。

1.3.3 细胞增殖率的测定 药物作用72h后，每孔加入5g/L MTT溶液10μL，4h后弃上清液，每孔加入DMSO 100 μL，振荡10min左右，在酶标仪上检测各孔吸光度值，波长为490nm。……