黄泽彬张泽延张晓东缪时英王琳芳杜润蕾

1中国医学科学院 北京协和医学院 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,北京 100005 2武汉大学 生命科学学院细胞与发育生物学系,武汉 430072

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白 2靶蛋白 C'末端 SBP-3×Flag标记的 HCT 116结直肠癌细胞模型的建立

黄泽彬1,张泽延2,张晓东2,缪时英1,王琳芳1,杜润蕾2

1中国医学科学院 北京协和医学院 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,北京 1000052武汉大学 生命科学学院细胞与发育生物学系,武汉 430072

目的建立非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白 2靶蛋白 (TPX2)C'末端 SBP-3×Flag标记的 HCT 116结直肠癌细胞模型。方法PCR扩增同源臂,构建 TPX2的腺相关病毒打靶载体,包装病毒后打靶 HCT 116结直肠癌细胞,G418和PCR筛选获得含有新霉素抗性基因的阳性细胞株,最后通过 Cre病毒感染去除抗性基因,并用 PCR方法筛选获得 TPX2 C'末端 SBP和 3×Flag内源性双标签的 HCT116结直肠癌细胞株。结果筛选获得 2个含有新霉素抗性基因的细胞株,随后经 Cre病毒感染得到去除新霉素抗性基因的阳性细胞克隆,并经Western blot检测验证了 SBP-3×Flag基因的敲入。结论成功建立了 TPX2 C'末端 SBP-3×Flag标记的 HCT116结直肠癌细胞模型。

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白 2靶蛋白;基因敲入;同源重组;HCT116;结直肠癌

DO I:10.3881/j.issn.1000-503X.2011.06.008

结直肠癌是近年来发病率和死亡率上升最快的肿瘤之一[1],与其他肿瘤一样,是一种多基因参与的渐进积累转化性疾病,其发生、发展以及组织学分型均与其相关的癌基因、抑癌基因和一些生长因子及其遗传不稳定现象有关[2]。从分子水平探讨结直肠癌的发病机制,研究相关基因作用途径和寻找理想的分子靶标对其早期诊断、治疗和预后以及探索其基因治疗和进一步提高防治水平都具有重要意义。……