季国志，钱文涛，陈伟，李洪亮，于景华,2

（1.内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司，呼和浩特 011500；2.天津科技大学，天津 300457；3.内蒙古农业大学，呼和浩特 010018）

酵母β-葡聚糖牛奶增强免疫力功能研究

季国志1,3，钱文涛1，陈伟1，李洪亮1，于景华1,2

（1.内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司，呼和浩特 011500；2.天津科技大学，天津 300457；3.内蒙古农业大学，呼和浩特 010018）

研究酵母β-葡聚糖牛奶增强免疫力功能。采用B1/Fq代健康雌性小鼠，设0.08，0.17，0.50 g/kg 3个剂量组（分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍），以纯牛奶配制，低、中、高剂量组质量浓度分别为8.0，17.0，50.0 g/L，经口每日1次给予小鼠相应浓度的受试样品，连续给样1个月，检测对小鼠体重、胸腺、脾脏器官、ConA诱导的脾淋巴细胞转化、DNFB诱导的DTH、溶血空斑数、血清半数溶血值（HC50）、碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性的影响。结果表明，细胞免疫功能、体液免疫功能、NK细胞活性均与对照组有显著差异，认为酵母β-葡聚糖牛奶具有增强免疫力功能。

酵母β-葡聚糖；牛奶；增强免疫力

0 引 言

酵母β-葡聚糖牛奶，是以酵母β-葡聚糖为主要原料的一款功能性牛奶产品。其功效成分酵母β-葡聚糖的免疫特性，近年越来越受到关注，特别是获得新资源食品批准后，酵母β-葡聚糖越来越多的被普遍应用于食品和保健品中，但目前在乳制品中尚未有过应用实例。本项目研究了酵母β-葡聚糖与牛奶结合后，对小鼠细胞免疫功能，单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性的影响，为明确其作用机理，将其应用于乳制品中打下理论基础。

1 实 验

1.1 样品

纯牛奶由内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司提供；

酵母β-葡聚糖由安琪酵母股份有限公司提供；乳化稳定剂以乳化剂、增稠剂及变性淀粉混合配制。

1.2 动物及分组

按体质量随机组，每组10只，各取4组分别进行二硝基氟苯诱导小鼠DTH实验、小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、小鼠抗体生成细胞及半数溶血值（HC50）实验、ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化及NK细胞活性实验等5个实验项目[1]。

1.3 饲养条件

小鼠在温度为20～25℃，相对湿度为40%～70%的实验室屏障系统中饲养。

1.4 剂量

酵母β-葡聚糖牛奶 （酵母β-葡聚糖质量分数32 mg/100 g）的人体推荐剂量250 mL/（人·日），折算成原料粉的人体推荐剂量为1 g/（人·日）（以60 kg体质量计），设0.08，0.17，0.50 g/kg三个剂量组（分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍）， 另设0 g/kg组以纯牛奶代替受试样品。受试样品用纯牛奶配制，低、中、高剂量组质量浓度分别为8.0，17.0，50.0 g/L，经口每日1次给予小鼠相应质量浓度的受试样品，小鼠灌胃量为10 mL/kg。连续灌胃1个月后测定各项增强免疫力功能指标[1]。

1.5 试剂与仪器

DNFB，SRBC，豚鼠血清，印度墨汁，RPMI1640，ConA，MTT，异丙醇，SA缓冲液，都氏试剂，YAC-1细胞，LDH基质液。

打孔器，T1000型电子天平，JA2003型电子天平，721型分光光度计，SG-603生物安全柜，EL808酶标仪，二氧化碳培养箱。

1.6 方法

ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法）；DNFB诱导小鼠迟发型变态反应（DTH）（耳肿胀法）；抗体生成细胞检测 （Jeren改良拨片法）；血清溶血素测定（半数溶血值）；小鼠碳廓清实验；小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（半体内法）；NK细胞活性测定（乳酸脱氢酶测定法）[1]。

1.7 数据分析

用SPSS10.0软件对各实验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换所得的数据进行统计处理[1]。

1.8 结果判定

在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性4个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。

“传统生物刺激素因其原料来源和加工技术的限制，效果不稳定且功能有限。”Synergie研究院总监Geroge Ebert教授强调。据悉，由康朴生产的DeltaChem生物刺激素使用全球顶尖的生产技术加工海草、腐殖酸、壳聚糖、氨基酸等天然精选材料，通过特种组合的方式达到效能最大化，其独特的生物发酵程序保证优良稳定的肥效。

其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫动能测定结果阳性。体液免疫功能测定结果中两个实验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性[1]。

2 结 果

实验过程中动物饮水摄食正常，外观无异常。

表1 酵母β-葡聚糖牛奶对小鼠体质量的影响g

2.1 酵母β-葡聚糖牛奶对小鼠体重的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，各剂量组体重增长值经方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。0.08，0.17，0.50 g/kg组与0 g/kg组比较，差异无统计学意义。

2.2 对小鼠胸腺、脾脏器官的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，胸腺/体质量、脾/体质量经方法齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理，结果如表2所示。由表2可以看出：0.08，0.17，0.50 g/kg组与0 g/kg组比较，差异无统计学意义。

表2 对小鼠胸腺、脾脏器官的影响

表3 对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响

表4 对DNFB诱导小鼠DTH的影响

2.3 对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，结果如表3所示。由表3可以看出，0.50 g/kg组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值显著高于0 g/kg组。

2.4 对DNFB诱导的小鼠DTH的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，结果如表4所示。由表4可以看出，0.17 g/kg和0.50 g/kg组耳壳增重显著高于0 g/kg组。

2.5 对小鼠溶血空斑数的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，溶血空斑数经方差齐性检验，不满足方差齐性要求，用秩和检验进行统计处理，结果如表5所示。由表5可以看出，0.17 g/kg和0.50 g/kg组溶血空斑数显著高于0 g/kg组。

表5 对小鼠溶血空斑数的影响

2.6 对小鼠HC50的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，结果如表6所示。由表6可以看出，0.50 g/kg组半数溶血值显著高于0 g/kg组。

表6 对小鼠HC50的影响

2.7 对小鼠碳廓清能力的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，结果如表7所示。由表7可以看出：0.08，0.17，0.50 g/kg组与0 g/kg组比较，差异无统计学意义。

表7 对小鼠碳廓清能力的影响

表8 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响

2.8 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，吞噬指数、吞噬百分率经sin-1P1/2（P为吞噬率，用小数表示）转化后经方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理，结果如表8所示。 由表8可以看出：0.08，0.17，0.50 g/kg组与0 g/kg组比较，差异无统计学意义。

2.9 对小鼠NK细胞活性的影响

经口给予小鼠不同剂量组的酵母β-葡聚糖牛奶1个月后，NK细胞活性经sin-1P1/2（P为NK细胞活性，用小数表示）转化后经方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理，结果如表9所示。由表9可以看出，0.50 g/kg组NK细胞活性显著高于0 g/kg组。

表9 对NK细胞活性的影响

3 结 论

酵母β-葡聚糖牛奶以0.08，0.17，0.50 g/kg连续给样1个月，得出如下结果：

（1）细胞免疫功能。ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验中0.50 g/kg组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值显著高于0 g/kg组；DNFB诱导小鼠DTH的实验中0.17 g/kg和0.50 g/kg耳壳增重显著高于0 g/kg组。

（2）体液免疫功能。血清半数溶血值实验中0.50 g/kg组小鼠血清半数溶血值显著高于0 g/kg组；抗体生成细胞检测实验中0.17 g/kg和0.50 g/kg组溶血空斑数显著高于0 g/kg组。

（3）NK细胞活性。小鼠NK细胞活性测定实验中0.50 g/kg组NK细胞活性显著高于0 g/kg组。

因此认为每人每天饮用酵母β-葡聚糖牛奶250 mL具有增强免疫力功能。

[1]中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范：2003版[S].

Study of enhancing immune function on yeast β-glucan milk

JI Guo-zhi1,3，QIAN Wen-tao1，CHEN Wei1，LI Hong-liang1，YU Jing-hua1,2
（1.Inner Mongolia Mengniu Dairy Industry Co.Ltd.，Hohhot 011500，China；2.Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457，China；3.Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China）

The function of enhancing immune of yeast β-glucan milk was researched.Healthy female mice of B1/Fq was as the research subjects,setting three dose groups with 0.08 g/kg,0.17 g/kg,0.50 g/kg（equivalent to 5 times,10 times,30 times of the recommended intake of human respectively）,low,medium and high dose group concentrations were 8.0 mg/mL,17.0 mg/mL,50.0 mg/mL which were all prepared with pure milk,the mice were given once a day by mouth with the appropriate concentration of tested samples.Then the weight,thymus,spleen organ,ConA-induced spleen lymphocyte proliferation,DNFB-induced DTH,the number of hemolytic plaque,half of hemolytic serum（HC50）,carbon clearance ability,macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes,NK cell activity were detected after one month with the tested samples.The results showed that cellular immunity,humoral immune function,NK cell activity were significantly different with the control group,it can be concluded that the milk containing yeast β-glucan can enhance the immune function.

yeast β-glucan；milk；enhancing immune function

TS252.1

A

1001-2230（2011）07-0022-03

2011-03-16

季国志（1982-），男，硕士研究生，从事食品加工与安全领域的研究。