徐玲玲,汤 滢,周春梦,肖 盈,张佩芬,许益镌

(华南农业大学昆虫生态研究室,广州 510640)

桔小实蝇 Bactrocera dorsalis(Hendel)属双翅目 Diptera,实蝇科 Tephritidae,果实蝇属 Bactrocera Macquart(崔俊霞等,2006),是一种重要的检疫性害虫。该虫寄主范围广,可为害芒果、柑桔、番石榴等250多种植物(CABI and EPPO,1996)。在成虫产卵期,常将卵产在果皮下 1～8 mm处,多成块状排列,产卵孔针戳状,在多数水果上,产卵孔肉眼不易观察。

自中国加入 WTO以来,国内外贸易不断加强,境内外农产品的流通更为频繁,桔小实蝇随商品流通而传播的风险加大(梁光红等,2003)。而且,进境旅客携带水果量小,批次多,隐蔽分散,难以控制,传播桔小实蝇机率很高(詹开瑞和赵士熙,2006)。目前,分子生物学手段已被用于桔小实蝇的快速鉴定(崔俊霞等,2006)。然而,桔小实蝇的检疫很大程度上依赖于水果受害后所形成的表面特征,一些刚受害不久的果实,由于其中桔小实蝇的卵尚未孵化或孵化不久未能在水果表面产生明显的为害特征而使得在检疫过程中容易被疏忽。另外,桔小实蝇的种群动态调查主要采用性诱剂对雄成虫进行监测其发生情况,但造成水果受害的却是雌虫,而对雌虫的监测缺乏有效的方法。雌虫在水果表面留下的产卵孔可被利用以了解雌虫的发生情况,以此弥补性诱剂监测的缺陷。桔小实蝇产卵孔较小,直径通常只有 0.2 mm(朱耀沂和叶万音,1987),多数水果表面的桔小实蝇产卵孔难以肉眼辩认。鉴于以上问题,如果能借助染色剂对桔小实蝇产卵孔进行染色处理,使其清晰易见,将具有重要有实际应用价值。

为此,本文以芒果、番石榴、夏橙为寄主水果,使用 6种染色剂对寄主水果上产卵孔进行染色,测定相应浓度和不同冷藏时间下的染色效果,以期为桔小实蝇的口岸检疫和种群监测提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试虫源

供试虫源采自华南农业大学校园内被桔小实蝇为害的蒲桃落果,带回实验室饲养。挑取老熟幼虫,置于细沙中化蛹,保持细沙一定湿度,用细纱网封口。8～10 d后,蛹羽化,将其置于 30 cm×30 cm×30 cm的木制笼子中,补充人工饲料(酵母粉：蔗糖 =1：3)和水分,保证桔小实蝇生长发育所需光照,待 8～10 d后,挑取健康成虫进行试验。

1.2 供试水果和染色剂

供试的 3种水果番石榴 Psidium guajava L.、芒果 Mangifera indica L.和夏橙 Citrus sinensis(L.)Osbeck均购于市面;

甲基蓝、龙胆紫、品红、曙红、藏红和刚果红等 6种染色剂由天津大茂化学试剂厂生产。

1.3 不同染色剂对产卵孔的染色效果试验

取新鲜完好番石榴、芒果、夏橙各 6个,分别置于 3个饲养有桔小实蝇的木制笼子中,桔小实蝇迅速布满水果表皮,搜寻试探,并将针状产卵器插入果皮下产卵。

经产卵 1～2 h后,取出水果用 70%的酒精冲洗,待风干后,分别放入浓度为 1%的甲基蓝、龙胆紫、品红、曙红、藏红、刚果红等 6种染色剂中,染色3 min,取出用清水冲洗干净。观察并记录水果表皮被染颜色、染色斑点大小、染色深浅等情况,挑取染色孔如发现有卵就确定为产卵孔,每 30个被染色的斑点为一个处理,每处理重复 5次。染色率的计算方法如下：

1.4 染色剂浓度对产卵孔染色效果的影响试验

根据 1.3试验结果筛选出 3种寄主水果最适染色剂,分别在浓度为 0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%和 3%的条件下进行染色。试验中每 30个被染色斑点为一个处理,每处理重复 5次。

1.5 冷藏时间对产卵孔染色效果的影响试验

将水果分别置于 3个养虫箱中,产卵 1～2 h取出被产卵水果置于 5℃的冰箱中冷藏保存。冷藏保存期间,每天观察果皮颜色、果皮皱缩及腐烂变化情况,并做好记录。在在冷藏保存 0 d,1 d,2 d,3 d,4 d,5 d取出水果进行染色,检查产卵孔,计算染色率。试验中每 30个被染色斑点为一个处理,每处理重复 5次。

2 结果与分析

2.1 3种寄主水果产卵孔的染色效果

在室温条件下,浓度为 1%的 6种染色剂分别对芒果、番石榴、夏橙 3种寄主水果染色结果见表1。结果表明,不同染色剂对芒果上桔小实蝇产卵孔的染色效果存在显著差异(F=4.454,P=0.005)。甲基蓝和藏红对芒果产卵孔染色效果较好,染色率分别为 90.67%和 86.00%;而龙胆紫的染色效果最差,染色率仅为 60.67%。甲基蓝将芒果产卵孔染成蓝色斑点,与芒果黄色果皮产生明显对比,使得肉眼清晰易辨,而芒果健康果皮不被染上颜色,结合染色率和染色现象,可确定芒果最适染色剂为甲基蓝。由表 1可知,不同染色剂对番石榴上桔小实蝇产卵孔的染色效果存在差异(F=4.381,P=0.006)。藏红对番石榴产卵孔的染色率最高,为 88.67%;藏红将番石榴产卵孔染色后,产卵孔清晰可见,呈紫红色,明显区别于番石榴青绿色果皮,结合染色率和染色现象,确定藏红为番石榴最适染色剂。染色剂的种类对夏橙上桔小实蝇产卵孔的染色率却无显著影响(F=1.889,P=0.134),但刚果红对夏橙产卵孔染色效果较好,染色率达 98.00%,高于甲基蓝和曙红的染色率;刚果红将夏橙产卵孔染成深红色,与夏橙深绿色果皮明显不同,结合染色率和染色现象,确定刚果红为夏橙的最适染色剂。

表 1 不同染色剂在 3种寄主水果上桔小实蝇产卵孔的染色率Table 1 Dyeing rate of 3dye for oviposition apertures of B.dorsalis

2.2 不同浓度条件下染色剂对桔小实蝇产卵孔的染色效果

根据 2.1的结果,分别选择甲基蓝、藏红和刚果红作为芒果、番石榴和夏橙的染色剂。结果表明,在供试的 6种浓度条件下各寄主水果上桔小实蝇产卵孔染色率均存在差异(P＜0.05)。但在染色剂浓度为 0.5%时染色效果较佳,同时节约染色剂,故可选择 0.5%的染色剂浓度(表 2)。

表 2 不同浓度条件下 3种寄主水果上桔小实蝇产卵孔的染色率Table 2 Dyeing rate of different concentrations for oviposition apertures of B.dorsalis

2.3 不同冷藏时间条件下染色剂对桔小实蝇产卵孔

寄主水果被桔小实蝇产卵后,在 5℃条件下,冷藏保存 0～5 d,水果表皮仍完好,芒果、番石榴略显皱缩,无腐烂现象,染色后,产卵孔清晰可见,染色率大多在 90%以上。结果表明,被桔小实蝇产卵后的芒果和番石榴经过不同时间的冷藏产卵孔染色率无显著差异(P＞0.05)。但夏橙在冷藏后,不同的冷藏时间产卵孔的染色率产生明显差异(F=3.988,P=0.009),除了第 3天染色率为 76.83%,其余均大于 80%(表 3)。由此可见,该方法亦适用于持续冷藏保存的水果产卵孔检测。

表 3 不同冷藏时间条件下 3种寄主水果上桔小实蝇产卵孔的染色率Table 3 Dyeing rate of dye for oviposition apertures of B.dorsalis on fresh fruit after cold conservation

3 结论与讨论

桔小实蝇在新鲜水果上留下针戳状的产卵孔,以肉眼很难找出其位置。但供试的 3种水果上的产卵孔经过染色后,形成了直径 0.2～0.5 mm的色斑,可容易被找出。不同的水果适用的染色剂种类不同,如甲基蓝对芒果上产卵孔的染色效果较好,而龙胆紫染色后颜色较淡而较易受干扰。番石榴上产卵孔经藏红染色后较易辨别,而刚果红则更适合于夏橙。

桔小实蝇的为害程度调查一般以果实受害率为指标。但鲜果上受害状则因季节、受害果种类不同而存在差异,通常自产卵 5～10 d后其中的幼虫至中龄或老龄才能显示出表面的受害特征(朱耀沂和叶万音,1987)。然而此时的调查结果受到卵的孵化率和幼虫死亡率等因素的影响,未能准确反映雌虫的产卵情况。而通过染色的试验能反映桔小实蝇在田间的产卵动态,更适时和准备掌握桔小实蝇对水果的为害情况。因此,在熟悉当地桔小实蝇发生情况的基础上,虽然染色法可作为调查的手段。在进出境截获的水果上,由于实蝇种类较多而且为害特征相近,在不清楚水果的来源情况下,虽然染色法不能直接用于判定是否遭受桔小实蝇为害,但是染色法可用于检查是否存在实蝇类害虫产卵孔,经进一步饲养观察可判断具体的实蝇种类。

References)

EPPO,CABI,1996.Quarantine Pests for Europe.Beijing：Chinese Agriculture Press,17.[EPPO,CABI,1996.欧洲检疫性有害生物.北京：中国农业出版社,17]

Cui JX,Xu Y,Wen WG,Chen XF,Zhang TX,2006.Rapid quarantine and identification of Bactrocera dorsalis.Chinese Bulletin of Entomology,43(5)：731-733.[崔俊霞,徐瑛,闻伟刚,陈先锋,张同心,2006.橘小实蝇快速检疫鉴定方法.昆虫知识,43(5)：731-733]

Chu YY,Ye WY,1987,A stainning method for ovipsoitional siteof oriental fruit fly on fresh fruit.Plant Protection Bulletin,29：77-79.[朱耀沂,叶万音,1987.鲜果上东方果实蝇产卵痕之染色检出法.植保会刊,29：77-79]

Liang GH,Chen JH,Yang JQ,Huang JC,Ji QE,2003.Advances in research of Bactrocera dorsalis(Hendel)in China.Entomological Journal of East China,12(2)：90-98.[梁光红,陈家骅,杨建全,黄居昌,季清娥,2003.桔小实蝇国内研究概况.华东昆虫学报,12(2)：90-98]

Zhan KR,Zhao SX,2006.Characteristics of fruit flies intercepted in Fuzhou airport and itsquarantine measures.China Plant Protection,26(6)：51-52.[詹开瑞,赵士熙,2006.福州机场果实蝇属害虫截获特征及检疫对策.中国植保导刊,26(6)：51-52]