潘寿文 方建强

母犬发情和适时配种鉴定技术研究现状

潘寿文 方建强

研究现状

母犬发情周期平均为6个月，发情周期的特点与其它家畜有较大区别。尤其是排卵时间在发情期间的变化范围较大，因而确定其准确的配种时间比较困难。对此国内外曾有大量研究，Evans等（1933）认为，阴道上皮细胞角质化的变化程度不能说明母犬的排卵时间。Bouchard等 (1991)在正常母犬发情周期中，在检测阴道上皮细胞角化动态的同时连续进行了血浆孕酮、LH的RIA和ELISA法测定，结果发现，两者的变化是一致的，接受交配前4 天，角化上皮细胞比例达到80%，LH达到峰值，阴道上皮细胞的动态变化与母犬发情周期中激素内分泌变化呈线性关系。依据这种相关关系进行适时交配，取得了满意的结果。

Newberry（1952）研究结果得知，当角质上皮细胞达到高峰，缺乏嗜中性白细胞，有核上皮细胞难以看到，红细胞也很少时，母犬进入发情期，开始排卵。此阶段母犬的外部行为表现为接受公犬爬跨或配种，表明已真正进入发情旺期，此时配种受胎率就高。公安部南京警犬研究所董君艳等人2004年研究指出，犬的排卵发生于发情期初期，排卵后发情还持续很长一段时间，这是犬不同于其他家畜的特征。每次排卵数可根据产仔数来推测，排出的卵约89%可受精妊娠，犬的排卵是从允许交配第48小时开始，最迟于第72小时全部结束（12小时之内）。石河子警犬研究所的试验结果表明，自然发情母犬的阴道上皮细胞角质化变化与Bouchard的报道相似，根据他的试验结果认为，母犬发情出血时间和“立定反射”以及阴道涂片相结合的发情鉴定，可以用于预测和确定母犬最适交配时间。通过对10头母犬的阴道细胞检查发现，在发情前期向发情期过渡时，浅层细胞增多，且逐渐角质化。在接近排卵时，看到的几乎都是角质化的表皮细胞（80%～90%）。最大角质化程度持续1天～6 天，平均为2.6天，这期间阴道粘膜为白色、干燥、浮冰样堆积非常明显，阴道分泌物非常少，主动接近公犬，接受交配。自然发情的中型母犬在发情出血后的第11天～13天角化上皮细胞比例均超过80%，可依据阴道涂片法辅助确定母犬发情的适配时间。Grunnert（1995）还研究指出，阴道上皮的组织学结构受雌激素的影响很大。在间情期，阴道粘膜由2层～3层非角质化的扁平细胞覆盖。进入发情前期，在雌激素的影响下，细胞层开始增生，且表层细胞逐渐角质化，最大程度的细胞增生可以达到20层。角质化的过程主要发生在发情期。从发情后期开始，阴道上皮逐渐退化。阴道细胞学检查的目的，即在此基础上达到认识发情周期的时间、辅助鉴定排卵时间及卵巢病变等 。

目前，国内外常用的确定母犬配种时间的方法主要有以下几种：根据母犬阴道出血时间、接受交配情况、阴道检查、阴道细胞学检查、阴唇的肿胀程度、血液的孕酮测定、通过B超对卵泡发育情况的检查等。以上方法均很难把握母犬的准确排卵时间，我们通常根据母犬阴道出血的时间，并在发情期增加配种次数的方法解决犬的繁殖问题。国外确定母犬的排卵时间更多的是把阴道细胞学检查、B超检查和孕酮检测方法结合起来，以便较准确地确定母犬的排卵时间。但后两种方法所需仪器设备值较高，一般的单位部门目前还很难满足。

研究与展望

一、阴道细胞学变化规律的运用及其意义

综合国内外研究表明，在母犬繁殖生理正常的情况下，阴道垢物细胞种类及比率，随不同生理阶段而呈明显的规律性变化，是一个重要的生理指标。可以作为鉴定发情旺期和确定配种适期的重要参考依据。

同时，根据阴道细胞学的变化，还可以诊断母犬发情是否正常。按细胞学的变化规律，可以减少只凭外阴部变化决定输精的误差。

当母犬阴道或子宫发生炎症时，阴道垢物涂片则出现有大量的嗜中性白细胞，当非角质化的上皮细胞有结成团块时，区别炎症和发情前期或发情后期是困难的。但是，若嗜中性白细胞和角质化上皮细胞同时出现，则表明有炎症。因为在正常情况下，这两种细胞类型不会一起出现。国内外阴道垢物涂片研究结果比较见下表。

表 国内外阴道垢物涂片研究结果比较

二、阴道垢物的采样及制片应当注意的几个问题

（一）阴道垢物采样前，应对母犬外阴部及其采样器具进行消毒，以防将尘埃和致病菌带入母犬阴道内。

（二）采样时，应尽量减少刺激量，器具轻进、轻出，不损伤外阴及阴道壁。

（三）采样器具插入阴道内10厘米左右处，不得或深或浅，以免引起垢物性状和细胞成分的改变，影响分析结果；制片应均匀一致，减少细胞堆集，以免影响对细胞的分类计数。

三、适时配种鉴定技术方法比较

外阴检查方法简单易行，操作方便，几乎不需要投入仪器设备，实践中多用此法，但对操作人员的经验水平要求较高，一般需要有多年的繁育工作经验才能较准确把握，但即使如此，因犬的个体差异性和生理机能的不同，该方法的准确性、科学性有待进一步提高。阴道检查法是在专用光源的帮助下，观察阴道黏膜颜色及分泌物等。判定母犬发情期的不同时期主要根据阴道黏膜的颜色变化、黏膜的肿胀情况及分泌物的多少。发情期：阴道粘膜颜色趋白色，阴道粘膜肿胀皱褶增生，分泌物少、呈肉水样，对于确定母犬的发情具有一定的说服力，而且不需投入更多的仪器设备。但此鉴定方法，多凭经验积累，少量化、主观性强。阴道细胞学检查借助普通显微镜，观察阴道分泌物的细胞构成比率。在母犬发情期的前期，有核上皮细胞和嗜中性白细胞几乎完全消失，红细胞约有30%左右；大量的主要是角质化细胞，约有80%左右；母犬发情期的后期，大量的仍然是角质化细胞。与前期比较略许见少，红细胞减少大半，有核上皮细胞逐渐增多，亦见有少量的嗜中性白细胞。其结果具有快速简便、准确易行等特点，国内目前也多有运用，应该注意，阴道细胞学检查并不能判定出现促黄体素峰和排卵时间，但据此可推断周期阶段。通过实践，腹腔镜检查法很难实现，因为犬的卵巢不同于其他家畜能看见，多数母犬的卵巢被厚厚的脂肪所包围，很难看到卵泡的发育情况。在实践中，此方法是否可行，还有待于在以后的工作中作进一步研究论证。孕酮测定是到目前为止确定母犬排卵时间的范围最可靠的方法，可以比较准确地确定排卵时间，从而提高配种受胎率。但孕酮测定工作量大、成本较高，多运用于个体研究，实际工作中的运用相对较少。通过口腔液镜检来鉴定母犬最佳配种时间的方法，可以在一定程度上提高母犬的受孕率和产仔数，是目前在母犬发情配种鉴定上的一种较为简便实用易掌握的方法，与平时的经验判断基本是相吻合的，可以作为经验判断法的补充和确定。B超检查方法能够较为准确的确定母犬的发情排卵，但因对B超仪器的质量要求及操作人员的技术要求均很高，因而也较多的运用于个体研究，实际工作中很难普及运用。

（作者单位：公安部南京警犬研究所，210012）

（编辑：李 冰）