唐利容,李炳奇,邵会娟,孙萍,谷新利

(1石河子大学动物科技学院,石河子832003;2石河子大学化学化工学院,石河子832003)

中药复方促孕灌注液对家兔子宫运动的影响

唐利容1,李炳奇2,邵会娟1,孙萍2,谷新利1

(1石河子大学动物科技学院,石河子832003;2石河子大学化学化工学院,石河子832003)

考察中药复方促孕灌注液对家兔子宫运动的影响,以成年雌性未孕的家兔为实验对象,进行子宫离体及在体试验,观察促孕灌注液对其收缩幅度、收缩频率及子宫活动力的影响。结果显示:与空白组相比,灌注液能极显著提高离体子宫收缩幅度(P<0.01)和收缩频率(P<0.01);能显著提高在体子宫收缩频率(P<0.05)和收缩幅度(P<0.01)。结论:中药复方促孕灌注液能显著增强家兔离体、在体子宫活动力。

促孕灌注液;收缩频率;收缩幅度

Abstract:This study was intended to observe the influence of traditional Chinese medicine prescription fertility-promoting intrauterine infusion liquid on the domestic rabbit in uterine contraction.Healthy white nonfertile rabbits were selected,with the biology function experiment systerm,records normal uterine in vitro orin vivosmooth muscle contractive motion,contractive frequency and contractive amplitude.The result showed that compared with the blank group,fertility-promoting intrauterine infusion liquid can noticeably improve the contractive amplitude(P<0.01)and the contractive frequency(P<0.01)in vitro.It can also improve the contractive amplitude(P<0.05)and the contractive frequency(P<0.01)in vivo.The conclusion is that it can noticeably strengthen the nonfertile dosmestic rabbitin vitroandin vivouterine smooth muscle contractive.

Key words:fertility-promoting intrauterine infusion liquid;contractive frequency;contractive amplitude

灌注液(剂)是指药材提取物、药物以适宜的溶剂制成的供子宫、乳房等灌注的灭菌液体制剂[1]。与传统的口服药相比,最大特点是改变了用药途径,药物直达患处,可更有效地治疗动物疾病。

目前,治疗奶牛不孕症的子宫灌注液发展较快,胡元亮等[2]筛选淫羊藿,益母草,红花等研制出治疗奶牛持久黄体、卵巢静止的促孕灌注液,经治疗后患病奶牛发情率可达90%以上;内蒙古农业大学研制了3个中药组方分别对卵巢静止、持久黄体、卵巢囊肿3种奶牛主要卵巢疾病进行了治疗,效果显著[3]。中药复方促孕散由石河子大学动物科技学院中兽医实验室研制,由淫羊藿、益母草、补骨脂等组方而成,主要用于治疗奶牛卵巢静止和持久黄体,经临床验证,具有良好的疗效,但作为传统散剂,存在用药量大,灌服困难,药材利用率低等缺点。针对这些缺点,我们将促孕散的主要活性成分(黄酮、生物碱等)经提取后再加附加剂,高温灭菌制成中药复方促孕灌注液,经测定,它的各项指标均符合中华人民共和国兽药典中对灌注液的要求,但还没有对其促孕效果进行研究。

根据灌注液的用药特点,本试验以雌性成年未孕家兔为实验对象,以原促孕散、缩宫素组为对照组,观测其对家兔离体子宫及在体子宫运动的影响,以期为该药的药效发挥提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品及试剂

中药复方促孕散(由石河子大学动物科技学院提供,经水煎浓缩为每mL含生药1.00 g的溶液,以下简称“促孕散”);中药复方促孕灌注液(自制,每mL含生药1.00 g,以下简称“灌注液”);缩宫素(宁波市三生药液有限公司生产,批号080703);苯甲酸雌二醇注射液(2 mg/mL,批号080414,宁波市三生药液有限公司生产);20%乌拉坦;洛氏液,其主要成分为(g/L):NaCl 9.0,KCl 0.42,CaCl20.24,NaHCO30.3,Glucose 2。

1.1.2 动物

体重2.5～3.0 kg成年雌性未孕的家兔12只(购于石河子大学实验动物中心),实验前48 h肌肉注射苯甲酸雌二醇,以提高子宫对药物的敏感性。

1.1.3 主要仪器

BL-420E生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司),HW-400SE恒温平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司),J H-IB肌张力传感器(成都泰盟科技有限公司),水浴锅,兔保定台等。

（4）稻渔综合种养模式。主要是“稻虾共作”“稻鳖共作”“稻鳅共作”等养殖模式，已成为全市渔业发展新的增长空间，是农民增收的重要途径。

1.2 方法

1.2.1 离体子宫试验

处死家兔,迅速剖腹取出子宫,剪取子宫角,轻柔剥离附着于子宫壁上的结缔组织和脂肪组织,将其分成3 cm左右的小段,置于新鲜配制的洛氏液中备用。

正式试验时,先在麦氏浴槽内通入预热的营养液,保持每次换液量一致。然后取一小段子宫角,两端用棉线结扎,一端固定于麦氏浴槽“L”形通气钩上,另一端固定于肌张力传感器上,棉线应松紧适度,使其负重约1 g。控制麦氏浴槽内的洛氏液温度在(38±0.5)℃,接着通入氧气,保持每秒通入1～2个气泡。待子宫收缩平稳后,开始记录其正常的收缩曲线,记为空白对照组。描记一段曲线后,累计加入灌注液0.2、0.4、0.6和0.8 mL,每个浓度观察描记至少10 min。描记完毕后,更换洛氏液,并更换一段子宫角,每组试验须重复6次,每重复1次试验即更换一段子宫。并按上述方法对促孕散水煎液及缩宫素进行观察描记。

1.2.2 在体子宫试验

家兔用20%乌拉坦以每千克体重5 mL,经耳缘静脉注射麻醉,在腹部沿腹白线作5 cm切口,牵引一侧子宫角,选取一段两端用棉线结扎,结扎应松紧适度,一端坠以1 g砝码,另一端固定于肌张力传感器上,棉线应松紧适度,使其负重约1 g。再将此侧子宫送回腹腔,然后开始观察并描记曲线,待子宫收缩平稳后,开始记录其正常的收缩曲线,记为空白对照组,正式试验时用注射器往试验段子宫内添加药物,鉴于结扎的子宫体积较小,不能加入过多药物,所以只加入灌注液、0.1 mL,待子宫收缩平稳后开始描记曲线,描记时间至少为20 min[6-7]。为避免药物间相互影响,1只家兔只作1种药物,每种药物重复以上试验6次,每重复1次试验须更换家兔。并按上述方法对促孕散水煎液及缩宫素进行观察描记。

1.2.3 观测指标及数据处理

观测并记录加入药液后相同时间段离体、在体子宫的收缩幅度、收缩频率及子宫活动力(收缩幅度×收缩频率),数据以平均值±标准差表示,经DPS软件进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 药物对家兔离体子宫收缩幅度的影响

由表1可知:

各试验组分别加入剂量为0.2 mL时,与空白对照组比较,其子宫收缩幅度都有不同程度的提高,缩宫素组提高最明显(P<0.01),其次是灌注液组(P<0.05),而促孕散组与空白组的差异不显著。

当各试验组药物增加到0.4 mL时,各组子宫收缩幅度继续呈提高的趋势,灌注液组与空白对照组相比较,提高明显(P<0.01)。当药物量增加到0.6 mL时,灌注液组和促孕散组子宫收缩幅度仍略有提高,缩宫素组有下降趋势,此时与空白组相比较,3组均显著高于空白组(P<0.01)。当药物量增加到0.8 mL时,灌注液组、促孕散组、缩宫素组间的子宫收缩幅度仍有增加。

表1 各组药物对家兔离体子宫收缩幅度(mm)的影响Tab.1 Effects of different drug on contractive amplitude(mm)of the uterus of rabbit in vitro

2.2 药物对家兔离体子宫收缩频率的影响

由表2可知:各试验组分别加入剂量为0.2 mL时,相较空白对照组,其子宫收缩频率都有不同程度的提高,灌注液组和催产素组显著高于空白对照组(P<0.01),而促孕散组与空白组没有显著差异。当各试验组药物增加到0.4 mL时,各组子宫收缩频率继续提高,灌注液组和催产素组仍显著高于空白对照组(P<0.01)。当药物量增加到0.6 mL时,灌注液组、促孕散、催产素均显著高于空白组(P<0.01)。当药物量增加到0.8mL时,灌注液组、促孕散组、缩宫素组的子宫收缩频率均减弱,此时灌注液组间与缩宫素组差异不显著。

表2 各组药物对家兔离体子宫收缩频率(次/min)的影响Tab.2 Effects of different drug on contractive frequency of t he uterus of rabbit in vitro

2.3 各组药物对家兔离体子宫活动力的影响

由表3可知:各试验组分别加入剂量为0.2 mL时,相较空白对照组,其子宫活动力均有不同程度的提高,灌注液组和催产素组显著高于空白对照组(P<0.01),而促孕散组与空白组间的差异不显著。当各试验组药物增加到0.4 mL时,各组子宫活动力继续提高,灌注液组和催产素组仍显著高于空白对照组(P<0.01)。当药物量增加到0.6 mL时,灌注液组、促孕散组子宫活动力仍有提高趋势,而催产素组子宫活动力明显降低。各组数值均显著高于空白组(P<0.01)。当药物量增加到0.8 mL时,灌注液组的子宫活动力略有增强,显著高于空白组和促孕散组(P<0.01)。

表3 各组药物对家兔离体子宫活动力的影响Tab.3 Effects of different drug on motoricity of the uterus of rabbit in vitro

2.4 各组药物对家兔在体子宫运动的影响

由表4可知,各试验组分别加入剂量为0.2 mL时,相较空白对照组,3组的收缩频率、收缩幅度及子宫活动力均有不同程度提高,灌注液组的收缩频率显著高于空白组(P<0.05),收缩幅度和子宫活动力都极显著高于空白组(P<0.01),而促孕散组的收缩频率和收缩幅度与空白组的相比较,差异均不显著。

表4 各组药物对家兔在体子宫的影响Tab.4 Effects of different drug on the uterus of rabbit in vivo

3 讨论

1)通过家兔离体及在体子宫试验,初步探索了促孕灌注液的促孕效果,试验结果表明该灌注液对子宫收缩频率、收缩幅度及子宫活动力均有明显的作用,且均高于传统的促孕散水煎剂,这证明经过剂型改进后的灌注液促孕效果更显著。

2)在离体子宫试验中,随着灌注液用量的增大,子宫收缩频率、收缩幅度及子宫活力3个指标均明显提高,当用药量增加到0.4 mL时,变化最明显,而当用药量增加到0.6 mL时,离体子宫的收缩幅度呈下降趋势,到0.8 mL时,其子宫收缩幅度和收缩频率均下降,下降量低于缩宫素,由此可以推测灌注液的促孕效果较缩宫素持久。促孕散组的子宫收缩频率变化趋势与灌注液组相似,子宫收缩幅度随着药量增加逐渐增大,但2个指标数值均小于灌注液组和缩宫素组,因此可推测,灌注液组对离体子宫的影响高于促孕散组。

3)在在体子宫试验中,从所测数据可以看出,在体试验的子宫收缩幅度及频率与离体试验的相近,但子宫活动力明显高于离体子宫,这可能是由于在体子宫仍与家兔体内其他器官有接触,使其在体子宫运动受到了影响,且由于该试验用药量的限制,没有更全面地观测到药物用量与其作用效果的关系,这将在今后进行进一步研究。

4)该复方主要由淫羊藿、益母草、补骨脂等组成。淫羊藿、益母草、补骨脂等都具有雌激素样作用,能改善微循环[8],增强子宫平滑肌的兴奋性[9]。而作为复方君药之一的益母草可使离体子宫的不规则自发收缩变成规律收缩,并增大收缩幅度,作用可维持数小时,且具有量效关系[5];益母草水提液和醇提浸膏对豚鼠、兔及狗在体子宫有直接的兴奋作用,使子宫收缩频率加快、张力增加、振幅增大[10],而同时淫羊藿中的成分有能降低子宫收缩频率的作用[8],从而使子宫运动更加协调地进行。

4 结论

综上所述,该复方促孕灌注液对家兔子宫具有良好、合理的调节作用,这是该药发挥功效的一个重要方面。

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Effects of Traditional Chinese Medicine Prescription Fertility-Promoting Intrauterine Infusion Liquid on Hystera Movement of the Domestic Rabbit

TANG Lirong1,LI Bingqi2,SHAO Huijuan1,SUN Ping2,GU Xinli1
(1 Animal science and technology Department,Shihezi University,Shihezi 832003;2 ChemistrY and Chemical Engineering Department,Shihezi University,Shihezi 832003)

S858.237.2

A

1007-7383(2010)04-0432-04

2010-01-19

唐利容(1983-),女,硕士生,专业方向为中草药制剂开发与应用;e-mail:tanglirong@stu.shzu.edu.cn。

谷新利(1963-),男,教授,博士生导师,从事中草药制剂开发与应用方面研究;e-mail:xlgu@shzu.edu.cn。