涂文升

广西肿瘤防治研究所药剂科（530021）

黄曲霉毒素P1（AFTP1）是黄曲霉毒素B1（AFTB1）的代谢产物，据文献报道：给恒河猴经腹腔注射AFTB1，尿中主要代谢产物为葡萄糖醛酸代谢产物，经β葡萄糖醛酸水解后，经鉴定主要为AFTP1，占恒河猴尿中黄曲霉毒素衍生物的60%[1]。为了进一步研究AFTB1经人体代谢后的产物AFTP1，特建立AFTP1的高效液相色谱测定方法。

1 仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪：包括LC-10AT泵、RF-530荧光检测器、威玛色谱数据工作站、CTO-10A柱温箱等，上海安亭科学仪器厂TGL-16B型离心机，上海精科实业有限公司XW-80型旋涡混合器。

甲醇为色谱纯，三氟醋酸（进口分装）、乙醇、醋酸铅均为国产分析醇，AFTP1对照品为美国Sigma公司产品。

2 色谱条件

分析柱：Shim-pack CLC-ODS C18（5.0mm×150mm，5μm），流动相：无水乙醇，流速：0.75mL/min，柱温：45℃，检测波长：EX：365nm，EM：435nm，灵敏度：1。

3 方法与结果

3.1 AFTP1对照品溶液的制备

精密称取AFTP150μg，置于5.0mL的量瓶中，加入一定量的甲醇，在旋涡混合器上充分混合溶解后，加甲醇至刻度，即为10.0ng/μL的标准品溶液。

3.2 样品溶液的制备

取头一天进食过花生食品的健康人的尿液9.0mL，加入过饱和的醋酸铅溶液1.0mL摇匀，用快速定性滤纸过滤，滤纸用少量氯仿洗涤，滤液转移至25.0mL的比色管中，加入氯仿在旋涡混合器上提取3次（10.0、10.0、5.0mL），收集氯仿提取液，水浴挥干，残渣用1.0mL无水乙醇溶液，转移至1.5mL的离心管中，离心10min（15000r/min），上清液即为样品溶液。

3.3 线性范围的考察

取上述“3.1”的标准品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5μL进样，按上述色谱条件测定，以AFTP1的进样绝对量为纵坐标（Y），AFTP1峰面积为横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方程为：137 177.4-11 3625.8Xr=0.9 996 线性范围25～125ng。

3.4 精密度试验

取上述样品溶液5.0μL，连续进样5次，记录峰面积，RSD=2.14%。……