郑振雨，荆 波，尹芸生

（山西医科大学第二医院骨科，山西太原 030001）

双磷酸盐已经被广泛应用于临床治疗骨代谢疾病，目前大多数实验已经阐明唑来膦酸对破骨细胞的作用机制，但是最近有发生下颌骨坏死的报道，所以其对成骨细胞和成骨质量的影响还存在争议。成骨细胞以自分泌和旁分泌的方式产生IGF-1，它是促进骨合成代谢的主要细胞因子。本实验拟通过观察唑来膦酸对成骨细胞增殖和IGF-1表达的影响，进一步探讨唑来膦酸的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 主要试剂及仪器 唑来膦酸（吉林省西点药业科技发展股份有限公司）；IGF-1酶联免疫试剂盒（美国安迪生物科技有限公司）；MTT（美国Sigma集团公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 成骨细胞培养 取新生24 h内的雄性SD乳鼠（山西医科大学实验动物中心提供）6只。培养方法见参考文献[1]。

1.2.2 实验药物的配制 唑来膦酸粉剂用PBS溶解，制成10-2mol/L作为储备浓度，保存在-20℃冰箱中。用PBS稀释，制成 含药 浓度为 10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L 的培 养基。对照组不加药。

1.2.3 MTT法检测成骨细胞增殖 取第三代成骨细胞以每孔5×103个接种于96孔板中，在37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后，改用含有唑来膦酸的DMEM培养基，样本含量为10孔，7d 后，于培养终止前 4h 换液并加入 MTT（5g/L）20 μl，继续培养4 h。吸弃上清液，每孔加入DMSO 100 μl，振荡10 min，490 nm波长下测定个孔吸光度（OD值）。

1.2.4 ELISA检测IGF-1含量 取第三代成骨细胞以每孔3×104个细胞接种于2块24孔板内，样本含量为8孔，于第2天加入含有唑来膦酸的培养液，以后每2天半换液1次，7d时取上清液，按照ELISA试剂盒的说明书进行操作，并计算IGF-1的含量。……