曹 磊，张世平，胡亿文

（广州市红十字会医院耳鼻喉科，广东广州 510220）

噪声、炎症及缺氧是导致耳蜗毛细胞损伤的重要原因，而缺氧在其他损伤因素的作用过程中常起着协同损伤的作用[1]。另外，在分娩过程中引起的新生儿窒息也是导致耳蜗毛细胞损伤的重要原因之一。深入研究缺氧性毛细胞损伤的分子机制可为耳蜗相关性疾病的防治提供理论依据。热休克蛋白（heat shock proteins，HSPs）是一类广泛存在于原核、真核细胞中，进化上高度保守的细胞保护蛋白。它们可在细胞遭受应激损伤（如高温、缺血、缺氧及炎症等）时反应性上调，以保护细胞对抗不利环境引起的损伤。热休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）是细胞内含量最丰富的热休克蛋白之一，其在螺旋缘、血管纹及毛细胞均有表达[2]，而HSP70在缺氧性毛细胞损伤时的表达情况，及其在缺氧性毛细胞损伤中的作用仍鲜有报道。为此，本实验拟观察在化学性缺氧模拟剂氯化钴（cobaltchloride，CoCl2）损伤毛细胞时HSP70的表达及HSP70在此损伤过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

CoCl2和槲皮素（quercetin，Quer）购自美国 Sigma-Aldrich公司，细胞计数试剂盒-8（cell count kit 8，CCK-8）购自碧云天生物技术研究所，HSP70抗体由Santa Cruz生物技术公司提供，DMEM高糖培养基购自Gibico公司。

1.2 细胞培养

永生化的HEI-OC1听细胞株由中山大学实验动物中心提供。HEI-OC1听细胞株具有外耳毛细胞的特性，能特异性地表达math1和myosin7a蛋白，在耳毒性的科学研究中已被广泛应用[3]。HEI-OC1听细胞株在33℃、7%CO2条件下，培养于含有15%胎牛血清的DMEM高糖培养基中。

1.3 CCK-8比色法检测细胞存活率

HEI-OC1听细胞株生长至70%融合时，接种于96孔培养板中，过夜培养，经不同浓度的CoCl2处理24 h，或用Quer预处理2 h后再与CoCl2共同处理24 h。……