吴晶晶 张鹏宇 张明智 王贵吉

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)临床常见。组织蛋白酶-D(Cath-D)是一种天门冬氨酸肽链内切酶，为雌激素调节的溶酶体蛋白酶，具有分解细胞外基质与松解细胞粘附的能力，促进肿瘤细胞的转移［1］。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是基质金属蛋白酶家族的重要成员，参与肿瘤的发展［2］。我们应用免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌组织中Cath-D和MMP-9蛋白的表达情况，并分析其与临床病理特征的相互关系，以深入探讨Cath-D和MMP-9在非小细胞肺癌发生发展中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料 选择2003年1月至2006年1月在我院行非小细胞肺癌术后存档的蜡块，共96例，其中男58例，女38例，年龄35～77岁，平均58.3岁，其中鳞癌50例，腺癌46例。患者术前均未经任何治疗。同时选取病理证实为正常肺组织60例标本作为对照组。

1.2 主要试剂 Cath-D和MMP-9单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学染色 免疫组织化学采用S-P法进行。具体步聚:脱蜡，水化组织切片，3%H2O2去离子水孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶;抗原修复后分别滴加一抗，室温37℃孵育1～2 h或过夜，PBS冲洗，5 min×3次;滴加生物素标记的二抗，室温37℃孵育20 min，PBS冲洗，5 min×3次;滴加辣根酶标记链霉卵白素，室温37℃孵育20～30 min，PBS冲洗，5 min×3次;应用DAB显色剂显色;自来水充分冲洗、复染、脱水、透明、封片。本实验中所有标本的检测均由同一病理技师完成，并在显微镜下显色观察，严格质控。实验中设用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定标准 Cath-D和MMP-9蛋白阳性染色均位于细胞质中，合并计算高倍镜下(×400)随机选择的5个视野中阳性细胞占全部计数肿瘤细胞的百分率，平均每个视野细胞质呈阳性反应的细胞数≥10%为阳性，无明显阳性反应或阳性反应的细胞数＜10%为阴性。……