邢洪存 郭芳芳 卢振霞*

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，发病率呈逐年上升的趋势。研究发现，肿瘤的发生可能由癌基因的激活、抑癌基因的失活引起，也可能是细胞凋亡异常的结果[1-4]。Survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子，属于凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族成员[5,6]。研究表明，Survivin选择性地表达于肿瘤组织，而在正常成熟组织中不表达或很少表达[7-9]。本研究旨在通过检测Survivin在结直肠癌组织中的表达情况，探讨其与结直肠癌发生、发展和预后的关系。

1 材料与方法

1.1 病例资料

标本取自2003年8月至2005年10月在吉林大学中日联谊医院及吉林省肿瘤医院腹科住院行根治性手术的58例原发性结直肠癌患者。所有标本均经严格筛选及2名以上医师进行病理诊断，术前均未经化疗、放疗或免疫治疗。其中男性31例，女性27例。患者年龄34～79岁，中位年龄55.8岁。结肠癌24例，直肠癌34例。低分化癌35例，中高分化癌23例。有淋巴结转移49例，无淋巴结转移9例。Dukes A期1例，B期7例，C期37例，D期13例。全部患者在手术中均采集癌组织及癌旁正常组织标本（距肿瘤边缘10cm处）各一块，立即置于液氮中冷冻，然后转移至-80℃低温冰箱中保存用于实验。

1.2 主要试剂

RNA提取及RT-PCR检测试剂盒购自Promega公司。

1.3 引物的设计及合成

根据GenBank中登录的Survivin基因序列（NM_001168）设计一对引物，P1：5'-ATTCGTCCGGTTGCGCTTTCCTTT-3'；P2：5'-TTCCT AAGACATTGCTAAGGGGC C-3'，扩增片段长度297bp。以β-actin为内对照，设计引物序列为：P1：5'- GGACCTGAC CGACT ACCTCA-3'；P2：5'- AATCCACATCTGCTGGAAGG-3'，扩增片段长度523 bp。均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.4 总RNA的提取

取冰冻组织50 mg切成薄片，用冷PBS洗涤后，按RNA抽提试剂盒说明抽提总RNA。经紫外分光光度计于260nm 和280nm波长下测定吸光度值，并行RNA 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳以检测抽提纯度及完整性。……