753000 石嘴山市老年病康复医院 宋洁

753000 石嘴山市煤炭总院 高爱玲

初步药效学研究表明，知母总皂苷具有确切的防治缺血性脑卒中活性，将其制备成薄膜衣片剂具有良好的临床应用前景。为便于质量控制对其进行了HPLC法测定知母总皂苷片中的知母皂苷B-Ⅱ含量的研究。

1 知母总皂苷片制备

1.1 概述 知母总皂苷是从知母中提取的总皂苷，初步药效学研究表明，本品具有确切的防治缺血性脑卒中活性。知母总皂苷为淡黄色粉末，无臭，味微苦，有一定吸湿性。片剂为常用口服剂型，且具有分剂量准确，稳定性好，易于工业化生产等优势，考虑到知母总皂苷具有一定的吸湿性，为增加片剂稳定性，故采用薄膜包衣技术将其制成薄膜包衣片。

1.2 规格以及片重 根据相关药效研究资料，推荐人每天服用剂量为知母总皂苷300 mg，为方便临床分剂量服用(每天服用3次，1片/次)，确定本品的规格为每片含知母总皂苷100 mg，设计片重为300 mg。

1.3 辅料选择[1]通常片剂制备中辅料的选用应遵循稳定、价廉的原则，针对知母总皂苷的理化性质，同时结合片剂生产工艺及工业化大生产的要求，筛选处方辅料。根据知母总皂苷具有良好的水溶性，粉末流动性较差等特点，为保证压片时有较好的流动性、较大的片剂硬度和较快的溶出速度，经过试验选用可压性好的微晶纤维素、预胶化淀粉和乳糖为稀释剂，为减少粘性，方便制软材，采用5%PVP无水乙醇溶液作粘合剂，预胶化淀粉兼作崩解剂，硬脂酸镁为润滑剂。采用湿法制粒法压片，平均裸片重约300 mg。考虑到知母总皂苷具有一定的吸湿性，为增加片剂稳定性，故采用薄膜包衣技术将其制成薄膜包衣片。

2 仪器和试剂、试药

2.1 主要仪器 色谱仪：Waters高效液相色谱仪，510泵；检测器：SEDEX 75型蒸发光散射检测器 (ELSD)，迪马公司；工作站：SR2000(上海军锐科技有限公司)；色谱柱：大连依利特hypersil ODS柱(4.6 mm×250 mm，10 μm)；流动相：乙腈∶水(25∶75)；流速为0.8 mL/min，载气压力3.5 bar，漂移管温度40℃，GAIN=7。

2.2 试剂 乙腈为色谱纯，水为重蒸水。

2.3 对照品 知母皂苷B-Ⅱ，来自陕西天森药物研究开发有限公司。

3 方法与结果

3.1 线性范围考察 对照品储备液的制备：精密称取知母皂苷B-Ⅱ对照品100.12 mg置100 mL量瓶内，以流动相：乙腈∶水(25∶75)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液。

知母皂苷工作曲线的绘制：取知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液0.1、0.2、0.3、0.5、1.0 mL，置10 mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，配制成浓度为10、20、30、50、100 μg/mL的溶液，作为知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液。分别取20 μL注入液相色谱仪，记录峰面积，并求对数，结果(图1)。

图1知母皂苷B-Ⅱ浓度与峰面积的线性关系

X为知母皂苷B-Ⅱ对照品的浓度，Y为峰面积。结果表明知母皂苷B-Ⅱ对照品在10～100 μg/mL范围内浓度与峰面积成良好的线性关系。

3.2 重复性 取浓度为300 μg/mL知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液，照上述色谱条件，连续进样5次，计算相对标准偏差，考查日内精密度，结果(表1)。

表1 日内精密度试验结果(峰面积)

取浓度为400 μg/mL知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液，照上述色谱条件，连续3 d，每天进样1次，计算相对标准偏差，考查日间精密度，结果(表2)。

表2 日间精密度试验结果(峰面积)

3.3 稳定性 取浓度为250 μg/mL知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液，照上述色谱条件，每隔2 h进样1次，共进样5次，计算相对标准偏差，结果(表3)。

表3 稳定性试验结果(峰面积)

3.4 回收率 称取辅料适量，按80%、100%和120%的比例，分别加入知母皂苷B-Ⅱ对照品适量，按片剂含量测定项下的条件和方法测定，计算回收率，结果(表4)。

表4 知母总皂苷加样回收率试验测定结果(n=3)

试验结果表明，知母皂苷B-Ⅱ3种不同浓度测定的回收率分别为96.3%、96.4%、96.1%，平均回收率为96.27%；日内和日间相对标准偏差分别为1.8%和0.75%。上述测定方法专属性强。

3.5 含量测定方法

3.5.1 色谱条件与系统适用性试验 用碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶水(25∶75)为流动相；载气压力3.5 bar，漂移管温度40℃，GAIN=7。理论板数按知母皂苷B-Ⅱ峰计算，应不低于2 000。

3.5.2 对照品溶液的制备 精密称取知母皂苷B-Ⅱ对照品100.12 mg，置100 mL量瓶内，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液。精密量取知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液3 mL，置10 mL量瓶中以流动相稀释至刻度，即为300 μg/mL的知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液。

3.5.3 测定法 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于知母总皂苷100 mg)，置100 mL量瓶中，加流动相适量，震摇使溶解，加流动相至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

分别取20 μL注入液相色谱仪，记录峰面积，计算结果。3批结果分别为60.9 mg、61.5 mg、61.2 mg，测定结果良好。

4 结论

通过上述HPLC法测定本人制备的知母总皂苷片中知母皂苷B-Ⅱ含量的研究，证实方法专属性强、简便，可用于产品大生产的质量控制。

[1]毕殿洲.药剂学[M].4版.北京：人民卫生出版社，1997：317-322.