陈映

(四川省什邡市人民医院 四川什邡 618400)

血小板输注作为一种重要治疗手段,在治疗因血小板减少或血小板功能障碍引起的出血性疾病方面显得尤为重要,但是反复输注导致的同种免疫,易使患者体内产生血小板相关抗体,影响血小板输注效果,导致血小板输注无效(PTR)。为此,笔者对已发生血小板输注无效的患者进行血小板相关抗体分析后,并根据抗体类型进行配合输注,效果明显,现报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象

2008年2月至2009年12月以来在本院住院并发生PTR的患者共12例,其中男性8例,女性4例,年龄20～63岁,平均42.5岁;血液病患者7例,其他肿瘤患者5例,所有患者均经过多疗程放疗和化疗后出现血小板减少,外周血小板计数<50×109／L,临床表现为体表有出血点、紫癜、鼻衄、血尿、消化道出血等,患者均有多次输血史或血小板输注史,并在最近1次血小板输注时发生PTR。所有患者出现PTR时均排除感染、发热、脾肿大、DIC等影响血小板输注疗效的非免疫因素。

1.2 方法

对所有PTR患者首先进行HLA抗体和HPA抗体检测与分类,(血小板抗体检测试剂盒由美国GTI公司提供)。取患者3mL血小板血浆6000r/min离心5min,弃血浆,用血小板保护液洗2次,然后取100µL,6000 r/min离心5min,洗2次,沥干,加120µL细胞离子缓冲液,混匀备用。将试剂盒复温至室温,取对应的反应条,分别用50µL上述的血小板加入对应孔中,37℃孵育30min,洗涤,显色,室温避光孵育30min,终止反应后于450nm测A值,判断结果。当患者检出HPA抗体时,对患者及供者血小板进行交叉配合,做单克隆抗体固相血小板抗体试验(MASPAT)(试剂盒由德国欧蒙医学试验诊断公司提供)。如患者检测出HLA-I类抗体,对患者进HLA-A、B SSP分型(试剂盒由美国TBG公司提供)。当患者既有HLA-I类抗体又有HPA抗体,首先对患者进行HLA-A、B分型,然后进行血小板交叉配合试验。患者所输注血小板来源于德阳市中心血站,血小板计数≥2.5×1011,体积200mL。所有患者在血小板输注前及静注后1h和24h分别采集静脉血作外周血小板计数(Sysmex XT-1800i全自动血细胞分析仪)。

1.3 疗效评定

评价血小板输注无效采用校正血小板数增值(CCI)[1],若1h CCI＜7.5,24hCCI＜4.5,则判为血小板输注无效。

2 结果

(1)12例PTR患者检出HLA抗体阳性共8例,阳性率为66.7%,HPA抗体阳性1例,阳性率为8.3%,HLA抗体合并HPA抗体阳性共3例,阳性率为25.0%。

(2)对8例HLA抗体阳性患者,在已建立的血小板库中查询,其A、B位点4个抗原供受者相合情况见表1。上述PTR患者经过HLA配合选择后输注C级以上配合血小板,除1例存在输注无效外,其余7例均有效,有效率为87.5%,其1hCCI值为(18.2±2.2),24hCCI值为(12.1±1.6)。对于1例存在HPA抗体的患者,采用血小板交叉配合后输注有效,其1hCCI值为18.5,24hCCI值为11.3。

(3)对于3例既有HLA抗体又有HPA抗体的患者,首先在血小板库中找到C级以上配合供者,然后分别与其进行血小板交叉配合,交叉反应阴性后再输注,结果输注有效2例,有效率为66.7%,有效者其1hCCI值为(19.5±1.7),24hCCI值为(11.3±1.4)。

3 讨论

临床上引发PTR的原因很多,其中以非免疫性因素为主,但对于反复输血或输血小板的患者,多以免疫因素为主,主要原因是反复输血后引发同种免疫反应所致。文献[2]报道反复输注血小板的患者中HLA抗体阳性率占80%,而单纯HPA抗体阳性仅占少数。从本次研究结果看,36例PTR患者体内血小板抗体检出类别及阳性率与文献报道基本一致。对于已发生PTR的患者,在排除非免疫因素后,如何进行血小板供者筛选至关重要。文献[3]报道,用于PTR患者血小板供者筛选的方法主要有2种:(1)基于HLA配型原则的筛选;(2)基于血小板交叉配合的筛选。美国的一项调查曾认为2种筛选策略一样有效。但是,血小板交叉配合试验仅对有单纯HPA抗体的患者有价值,而HLA配型筛选也仅对有HLA抗体的患者适用,上述2种筛选策略对具有联合抗体患者的应用是有局限性的。为此,首先对发生PTR的患者进行抗体分类,然后有针对性地筛选供者,效果良好[4]。但是,对于具有HLA抗体或联合抗体的患者,当选择C级以上配合并进行血小板交叉配合时,并未完全解决PTR问题,可能原因为受体除了有HLA抗体外,还可能有未被检出的血小板特异性抗体和／或粒细胞抗体等存在。

表1 8例HLA抗体阳性患者在血小板库中查询结果

[1]Muller—Steinhardt M,Schlenke P,Wagner T,et a1.Transfusion of platelet concentrates from pooledbuff-coats:comparson of beside VS prestorageleukofiltration[J].Transfu Med,2000,10(1):59～65.

[2]刘达庄,包于勤,陆萍,等.血小板抗体检测在输血中的重要意义[J].中国输血杂志,1999,12(2):116～119.

[3]张志华,郝长来.血小板无效输注的研究进展EJ3[J].临床血液学杂志,2007,20(3):186～188.

[4]张献清,穆士杰,夏爱军,等.血小板输注无效患者的供者筛选策略及临床研究[J].临床输血与检验,2009,11(2):126～128.