杜武英,黄 江,胡旭初,余新柄,徐 劲 ,廖兴江,戴佳琳

猪带绦虫为世界性分布,成虫寄生于人体肠道引起猪带绦虫病,幼虫寄生于人体皮下、肌肉或内脏引起囊尾蚴病〔1〕。在我国,猪带绦虫病与囊虫病分布及流行态势多呈片状分布,且青壮年发病率较高,少数地方近年来儿童囊虫病有上升趋势。本课题组近年来从猪带绦虫基因组及蛋白质组学的研究入手,系统地开展猪带绦虫基因的鉴定和功能研究。我们从猪带绦虫成虫全长cDNA文库中克隆了一个乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的同源基因,力图通过对该基因及其编码的蛋白结构和特征进行全面的生物信息学分析,以指导该基因的克隆表达、重组蛋白的纯化及免疫学特性的初步研究,从而为其生物学功能研究及其在诊断、药物及疫苗方面的应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 猪带绦虫成虫虫体标本 采自四川甘孜州雅江县,猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库由北京华大基因研究中心构建,大规模测序得到多个表达序列标签(expressed sequence tag,EST)、利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站的基本局部比对搜索工具(basic local aligment search tool,Blastx,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)归并EST获得Unique Gene(Unigene)由本课题组与上海英骏生物公司合作完成。编码猪带绦虫成虫LDH基因文库质粒编号为0_001458。

1.1.2 质粒,菌株 原核表达质粒pET-28a(+)和大肠杆菌BL-21/DE3由中山大学医学院病原生物学实验室保存。

1.1.3 感染猪带绦虫猪血清 由贵阳医学院寄生虫学教研室提供,病人血清采自猪带绦虫流行区。

1.1.4 主要试剂和工具酶 NcoⅠ,XhoⅠ,T4 DNA连接酶,DNA标准(DL2000)均购自……