王明成,曹晓真,何生虎

(1.黄淮学院农林科学系,河南驻马店463000;2.宁夏银川市畜牧兽医工作站,宁夏银川750004;3.宁夏大学农学院,宁夏 银川750021)

金霉素具有促进肉鸡生长、预防病原微生物感染和疾病发生等方面的重要作用,因此作为促生长剂而在肉鸡生产中已广泛应用,在金霉素在肉鸡日粮中添加的量也远超过规定的40 mg/kg体重的添加量。研究发现,日粮中添加有效剂量的金霉素可以提高断奶仔猪的采食量,改善肠道黏膜的结构,提高断奶仔猪采食量,降低腹泻率[1]。为探明动物饲料中适量添加金霉素促生长的依据,过量添加对肉鸡的十二指肠组织学结构的影响,为金霉素在生产实践中的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计与饲养管理 200只艾维茵商品肉鸡随机分为4组,第1组为对照组,其余3组在日粮中分别添加30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg体重金霉素。基础日粮以玉米-豆粕为主,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂添加不同浓度金霉素的基础日粮。从1日龄开始饲喂,按肉鸡免疫程序接种疫苗,严格遵守《商品肉鸡饲喂管理条例》,肉鸡0～3周时饲喂前期基础日粮,4～7周时饲喂后期基础日粮,49 d出栏。1.2 日粮配方 见表1。

表1 基础日粮配方

1.3 样品采集和保存 在艾维茵商品肉鸡达到49日龄时,各组随机采集10只鸡的十二指肠,并且每只鸡的十二指肠分成2份,一份用10%甲醛溶液浸泡,用于制作石蜡切片;另一份修整成大小为2 mm×1 mm×0.5 mm组织块,用2.5%戊二醛溶液浸泡,用于制作电镜切片。

1.4 组织切片的制作及染色方法 10%福尔马林溶液固定,石蜡包埋,常规切片,脱蜡,苏木精-伊红染色(H.E.染色),二甲苯透明,中性树胶封片[2-3],光镜观察并拍照。

经H.E.染色后,细胞核被苏木精染成紫蓝色,多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。

1.5 电镜切片的制作 (1)预固定,在青霉素小瓶中预先放入2.5%戊二醛溶液,将修好的组织放入青霉素小瓶中。4℃条件下,固定2～2.5 h。(2)冲洗加入0.1 mol/L二甲砷酸钠缓冲液。更换3次,每次间隔2 h。然后过夜。(3)后固定在4℃条件下,1%四氧化锇后固定2 h。(4)脱水于4℃条件下,各种系列乙醇逐级脱水,30%-50%-70%-80%-90%-100%(Ⅰ,Ⅱ)。(5)包埋在100%乙醇和环氧丙烷混合液中5 min×3次,浸透组织块,置换用环氧丙烷与包埋剂比例为1∶1;浸透1～2 h。包埋液37℃浸透2～3 h,包埋聚合,37 ℃温箱过夜,纯包埋液包埋,在60℃烤箱中烤24 h,整修包埋头[4]。(6)切片,超薄切片(50～70 nm)。(7)染色以醋酸铀-柠檬酸铅双染色。(8)观察用日立H-600透射电镜观察,并拍照。

2 结果

2.1 光镜观察结果 禽类小肠绒毛中无中央乳糜管(centrallacteal)的结构,这点与哺乳动物不同[5]。而且黏膜下层不发达,很薄,有的部位甚至无此层(图1)。禽类无十二指肠腺,但在肌胃和十二指肠之间有一狭窄过渡区,含有类似于十二指肠腺的黏液腺体。试验组与对照组比较,发现十二指肠黏膜上皮的杯状细胞明显增加(图2)。

2.2 电子显微镜观察结果 对照组十二指肠微绒毛完整。肠上皮细胞排列整齐,核椭圆(图3)。试验组细胞内粗面内质网轻度扩张,微绒毛有部分脱落,线粒体嵴溶解,杯状细胞胞质中黏原颗粒(mucinogen granule)增加。细胞核固缩,线粒体溶解,嵴消失;内质网扩张,黏原颗粒电子密度低,有薄膜包裹;杯状细胞内众多黏原颗粒紧密相连,将顶部其他胞质挤到一侧(图4)。

图3 对照组十二指肠微绒毛完整,肠上皮细胞排列整齐,核椭圆(×4 000)

3 讨论

图4 试验组(50 mg/kg)细胞核固缩,线粒体溶解,内质网扩张,微绒毛部分断裂(×5 000)

杯状细胞的主要功能是分泌黏蛋白。黏蛋白是一种糖蛋白,释入管十二指肠内成为润滑性黏液涂布于上皮表面,对上皮具有保护作用[6]。十二指肠的主要功能是分泌黏液、刺激胰消化酶和胆汁的分泌,为蛋白质的重要消化吸收场所,部分脂肪、葡萄糖、氨基酸、甘油、水等也在十二指肠消化吸收[7]。杯状细胞的增多,增强了十二指肠的消化吸收能力,同时加速了部分营养物质在此的消化吸收[8]。本试验在日粮中添加不同浓度的金霉素后,试验组比对照组肉鸡的十二指肠杯状细胞数量明显增多,说明金霉素可显著提高肉鸡十二指肠杯状细胞的数量,可以更好地发挥其潜在的物理屏障,从而保护机体受到外界病原微生物的侵害。但是高剂量的金霉素(50 mg/kg)对十二指肠的肠绒毛有一定的损伤,杯状细胞的细胞器也造成了不同程度的损害。因此,在动物日粮中应适量添加金霉素,才能够提高动物的肠黏膜免疫功能,增强黏膜的屏障功能。

4 结语

根据本试验结果可以表明,肉鸡日粮中添加低浓度金霉素,可以促进十二指肠的消化吸收功能,但添加高浓度金霉素对十二指肠有一定的毒副作用,尤其是超过50 mg/kg时,十二指肠的杯状细胞发生核固缩、线粒体溶解、内质网扩张的病理变化。因此建议生产实践中要适当添加。

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